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- 610SATLB 產(chǎn)品型號(hào)
- revvity 品牌
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訪問次數(shù):67更新時(shí)間:2024-10-31 10:28:03
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | 610SATLB |
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產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
610SATLB | HTRF STREPTAVIDIN-TB | 20K PTS |
鏈霉親和素已用鋱穴狀化合物(Tb crypate)進(jìn)行標(biāo)記。與鏈霉親和素以高親和力結(jié)合(Ka = 1015M-1)。這種結(jié)合快速且穩(wěn)定,使其成為酶測(cè)定、蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)結(jié)合測(cè)定和分子生物學(xué)測(cè)定等各種分析中的理想選擇。
產(chǎn)品特點(diǎn)
分析原理
在均相時(shí)間分辨熒光(HTRF)相互作用分析中,一部分(直接或間接)用供體進(jìn)行標(biāo)記,另一部分用受體進(jìn)行標(biāo)記(同樣直接或間接)。信號(hào)強(qiáng)度與兩部分的結(jié)合程度成正比。在此處所示的示例中:鏈霉親和素 - 鋱穴狀化合物與化的標(biāo)記部分 A 結(jié)合,而B部分 * 與用 HTRF 受體標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合。* B部分也可以是化、帶有標(biāo)簽、Fc 融合的。在這些情況下,使用相應(yīng)的用受體標(biāo)記的 HTRF 試劑(抗標(biāo)簽、抗物種、蛋白 A、鏈霉親和素)進(jìn)行檢測(cè)。
分析方案
如下示例描述了使用 20 µL 最終分析體積檢測(cè)化標(biāo)記的A部分和未標(biāo)記的 B部分* 之間相互作用的方案。分裝兩部分(10 µL),孵育,加入鏈霉親和素 - 鋱穴狀化合物(5 µL)和用受體標(biāo)記的抗 B部分(5 µL),孵育并讀取。* B部分也可以帶有標(biāo)簽、Fc 融合或直接標(biāo)記。在這些情況下,使用相應(yīng)的用供體標(biāo)記的 HTRF 試劑(抗標(biāo)簽、抗物種、蛋白 A、鏈霉親和素)進(jìn)行檢測(cè)。
分析細(xì)節(jié)
測(cè)試次數(shù)與活性部分有何關(guān)系?
每個(gè)孔的平均結(jié)合物數(shù)量反映了總體生物材料含量。通常優(yōu)選使用活性部分的量而不是總結(jié)合物的量。對(duì)于穴狀化合物和 d2 結(jié)合物,總結(jié)合物的量等于活性部分的量,因?yàn)闃?biāo)記的分子量可以忽略不計(jì)。對(duì)于用 XL665 標(biāo)記的實(shí)體則不是這樣,總結(jié)合物的量將根據(jù) XL665 結(jié)合物的最終摩爾比而變化,但是,由 Revvity 提供的活性部分的量是恒定的,并基于訂購(gòu)的測(cè)試次數(shù)。
A
穴狀化合物和 XL665 結(jié)合物的推薦用量
穴狀化合物結(jié)合物不能過量,以防止讀數(shù)器飽和和不可接受的背景水平。在大多數(shù)情況下,1 至 5nM 的穴狀化合物濃度是合適的,并且根據(jù)所使用的與 HTRF 兼容的讀數(shù)器,在 620nm 處將產(chǎn)生 20,000 至 80,000 cps。XL665 結(jié)合物必須盡可能與其分析對(duì)應(yīng)物匹配,以便最大數(shù)量的生物分子被 XL665 受體標(biāo)記。因此,要在 20nM 的分析濃度下檢測(cè)標(biāo)記分子,抗標(biāo)簽 - XL665 的濃度應(yīng)是等摩爾或更高。