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摘要本應用簡報介紹了一種簡便的樣品前處理方法，結合 Agilent 1290 Infinity II LC 和Agilent 6470A 三重四極桿液質聯用系統(tǒng)對食品基質中的多類生物堿進行高通量測定。采用基質匹配校準標樣進行校正，發(fā)現在稀釋的面包、牛奶、葡萄酒和米粉提取基質中，18 種生物堿在 0.50–50.0 µg/L 濃度范圍內具有非常好的線性。考慮到10 倍的稀釋倍數，這相當于基質中 5.0–500 µg/kg。所有分析物的線性回歸系數均大于 0.995。在 0.5 µg/L 的低校準濃度下（相當于樣品中 5.0 µg/kg），所有分析物的信噪比 (S/N) 均大于 10。在濃度為 5、50 和 250 µg/kg 的四種不同基質中，分析物回收率范圍為 90%–110%，相應的相對標準偏差在 2.3%–7.9% 之間。結果表明，該方法具有很高的靈敏度、準確度和精密度。這種簡單的樣品前處理與快速LC/MS/MS 檢測相結合的方法可以用于食品基質中多類生物堿殘留的高通量篩查。

前言生物堿是一類具有含氮雜環(huán)結構的天然堿性物質。它們通常表現出很高的生物活性，是中藥的主要成分。生物堿存在于一些植物中，意外攝入可能會造成有害影響[1]。根據歐盟法規(guī) 2016/239 (EU)，某些嬰幼兒谷類食品中的莨菪烷生物堿（包括阿托品和東莨菪堿）的最大殘留量 (MRL) 低至 1 µg/kg[2]。在歐盟No. 37/2010 (EU) 法規(guī)中，把秋水仙堿列入了禁止清單[3]。中國允許在所有動物源性食品基質中使用阿托品，并且未規(guī)定MRL，國內也沒有其它法規(guī)對食品基質中生物堿的含量進行限制[4]。然而，含生物堿的雜草意外混入農作物或家畜意外攝入含生物堿的雜草可能增加公眾的暴露風險。因此，建立靈敏可靠的方法對食品基質中的生物堿進行常規(guī)監(jiān)測至關重要。事實上，生物堿的物理化學性質差異很大，并且還涉及許多復雜的基質。開發(fā)一種可靠的方法來同時監(jiān)測多種生物堿面臨著較大的挑戰(zhàn)。現有的報道主要集中在具有相似化學性質的生物堿的同時檢測[5,6]。本應用簡報提供了一種簡單的樣品前處理方法，結合快速 LC/MS/MS 方法，實現對牛奶、葡萄酒、面包和米粉等 4 種食品基質中的 5 類共 18 種生物堿的同時高通量測定。

實驗部分標樣制備和樣品前處理步驟所有 5 類共 18 種生物堿化合物均購自安譜科技公司（中國上海），用甲醇配制為1.0 g/L 的儲備液，于 –20 °C 下保存。然后用相應的基質提取物稀釋儲備液，得到校準標樣溶液。將固體樣品 (2.0 g) 加入 50 mL 離心管中，然后加入 5 mL 水進行水化。再加入10 mL 乙腈，接著加入 5 mL Na2EDTAMcllvaine 緩沖液 (pH 3)。將離心管充分渦旋混合 2 分鐘，然后在 7500 rpm 的轉速下離心 5 分鐘。收集上清液，經 0.22 µm膜過濾后，用 LC/MS 進行分析。液體樣品（如牛奶和葡萄酒）遵循相同的萃取程序，只是省去初始水化步驟

液相色譜系統(tǒng)Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀，配備如下模塊：• Agilent 1290 Infinity II 二元泵，內置脫氣機• Agilent 1290 Infinity II 自動進樣器，帶針座反沖功能• Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱

結果與討論生物堿在酸性條件下很容易被質子化。因此，實驗選擇 ESI 正離子電離下的MRM 掃描模式。實驗中考察了不同的流動相組合，包括水/甲醇、水/乙腈、0.1% 甲酸/甲醇和 0.1% 甲酸/乙腈。大多數生物堿在甲醇中比在乙腈中的響應更好。在酸化水中，色譜峰更窄、更對稱且強度更高；而在非酸化水中，觀察到峰拖尾且強度較低。因此，最終選擇酸化的水/甲醇作為二元流動相。然后，在所選流動相條件下對 MRM 參數進行了優(yōu)化。表 1 列出了得到的參數。對于那些色譜上未能得到理想分離的化合物，通過其特征 MRM 離子對可實現對化合物的準確定量。圖 1 顯示了來自不同類別的 18 種生物堿的典型 MRM 疊加色譜圖。