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重組蛋白真核表達采用原核表達系統(tǒng)進行研究,主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉化到細菌中,通過IPTG誘導和終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點是可以在短時間內獲得基因表達產物,所需成本相對較低。
目前的表達系統(tǒng)各有利弊,但一般理想的表達系統(tǒng)滿足以下幾點:一是特異性,不受其他內源性因素影響,只能通過外源性無毒物激活。二是不干擾,不干擾細胞通路。以及誘導劑的誘導性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。
因此,在選擇表達系統(tǒng)時,必須充分考慮各種因素,如蛋白質性質、實驗條件、生產成本、表達水平和安全性。權衡利弊后,選擇相應的表達系統(tǒng)。
原核表達系統(tǒng)與重組蛋白真核表達系統(tǒng)的區(qū)別:
1.根本的區(qū)別是,原核表達系統(tǒng)的表達系統(tǒng)是原核細胞;真核表達系統(tǒng)在真核細胞如酵母細胞、昆蟲細胞和哺乳動物細胞中表達。
2.兩種表達系統(tǒng)都通過含有原核或真核啟動子和其他表達相關元件的質粒系統(tǒng)表達外源基因。
3.與真核表達系統(tǒng)相比,原核表達系統(tǒng)的表達效率易于優(yōu)化和調整,表達量高。然而,當用于表達真核外源基因時,由于不同的蛋白質折疊和糖鏈修飾,其應用受到限制。真核表達系統(tǒng)的表達量相對較低。雖然酵母和昆蟲系統(tǒng)的表達量相對較高,但哺乳動物基因的表達也存在不足。