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CR3002-快速T4 DNA連接酶 T4 DNA Ligase
CR3002-快速T4 DNA連接酶 T4 DNA Ligase

地:北京

貨物所在地:北京北京市

更新時間:2024/4/30 10:19:21

訪問次數:73

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供應簡介
快速T4 DNA連接酶 T4 DNA Ligase (Rapid)催化雙鏈DNA或RNA上相鄰的5'-磷酸末端和3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接,還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。


詳細介紹

產品概述
T4 DNA Ligase催化雙鏈DNA或RNA上相鄰的5'-磷酸末端和3'-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接,還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。


產品組分
T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)


來源
克隆有來自T4噬菌體DNA Ligase基因的重組E. coli菌株。


保存條件
-30 ~ -15℃保存,≤0℃運輸。


單位定義
1單位指在50 μl 1 × T4 DNA連接酶反應緩沖液中,23℃反應條件下,30分鐘能使50% 的經HindⅢ消化的λDNA片段(100 ng)連接所需的酶量。


反應緩沖液
2× Rapid Ligation Buffer
132 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6,000
10 × T4 DNA Ligase Buffer
500 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C
100 mM MgCl2
50 mM DTT
10 mM ATP


注意事項
1. 建議插入片段與載體的摩爾比應在3:1 - 10:1。
2. 平末端載體與片段進行連接時,應首先將載體進行去磷酸化處理,防止其自身環(huán)化。
3. dA-Tailing產物與DNA Adapter的摩爾濃度比在1:10 - 1:20。
4. T4 DNA Ligase不穩(wěn)定,使用時冰上操作,用完立即放回-20℃。


實驗案例1: DNA片段和載體DNA的連接
1. 在微量離心管中配制如下連接反應體系:

ddH2O

to 10 μl

10 × T4 DNA Ligase Buffer

1 μl

插入片段a

0.3 pmol

載體DNAb

0.03 pmol

T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)

0.5 μl

a. 插入片段與載體的摩爾比應在3:1 - 10:1。
b. 平末端載體與片段進行連接時,應首先將載體進行去磷酸化處理,防止其自身環(huán)化。

2. 16°C過夜反應
3. 轉化
4. 將連接產物加入到100 μl感受態(tài)細胞中(連接產物的體積不應超過感受態(tài)細胞體積的1/6),輕輕彈勻,冰上孵育30 min。
5. 將離心管置于42°C水浴,不要晃動,準確熱激90 sec后,立刻置于冰水浴中,靜置2 - 3 min。
6. 向離心管中加入900 μl LB或SOC培養(yǎng)基,150 rpm,37°C振蕩培養(yǎng)45 min,使菌體復蘇,抗性基因表達。
7. 5,000 rpm(2,500 × g)離心5 min,去掉900 μl上清。用剩余培養(yǎng)基將菌體重懸,用無菌涂布棒在含有正確抗性的平板上輕輕涂勻。室溫正置10 min。
8. 待菌液被平板吸收后,37°C倒置培養(yǎng)過夜。

▲如果使用超級感受態(tài)細胞(轉化效率>108 cfu/μg),可直接吸取100 - 200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4°C保存,一周之內都可重新涂板。


實驗案例2: DNA文庫構建中接頭連接反應
1. 在微量離心管中配制如下連接反應體系:

dA-Tailing產物a

10 μl

2 × Rapid Ligation Buffer

15 μl

DNA Adapter b

2.5 μl

T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)

1 μl

ddH2O

1.5μl

用移液器輕輕吹打混勻
a. 產物為5'端磷酸化,3'端帶dA的DNA片段。
b. dA-Tailing產物與DNA Adapter的摩爾濃度比在1:10 - 1:20。


2. 在PCR儀中進行連接反應:

30°C

10 min

4°C

Hold

反應結束后,立即進行后續(xù)反應。


產品目錄

貨號

產品名稱

規(guī)格

目錄價格

CR3001

T4 DNA Ligase (Rapid)

(2000 U/μl)

40000U

125

CR3002

T4 DNA Ligase (Rapid)

(2000 U/μl)

200000U

460

注:小包裝需加收干冰費用








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