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人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書	Human intrahepatic biliary epithelial cell medium	100mL

人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
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人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

1,000 URNA Polymerase, T3, 1000 U

1 kit (25 reactions)PCR Dig Probe Synthesis 1pc

2.5 gCollagenase H, 2.5g, non-steri

1,000 U (4 x 250 U) for up to 2,000 reactions of 20 µl final volume each containing 0.5 U Taq DNA PolymeraseTaq DNA Polymerase, 5 U/μl（up to 3 kb）

1,000 U (4 x 250 U) for up to 2,000 reactions of 20 µl final volume each containing 0.5 U Taq DNA PolymeraseTaq DNA Polymerase, 1 U/μl（up to 3 kb（）

2,500 U (10 x 250 U) for up to 5,000 reactions of 50 µl final volume each containing 0.5 U Taq DNA PolymeraseTaq DNA Polymerase, 5 U/μl（ up to 3 kb）

125 U for up to 50 reactions of 50 µl final volume each containing 2.5 U FastStart Taq DNA PolymeraseFastStart High Fidelity PCR System, dNTPack（up to 5 kb）

2,500 U (10 x 250 U)FastStart Taq DNA Polymerase,
人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基說明書桿菌屬 Lactobacillus sp.燼灰鏈霉菌 Streptomyces cinereogriseus

人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞CCD-1095Sk(人腺浸潤性導(dǎo)管旁皮膚細(xì)胞)

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人急性混合型白血病細(xì)胞

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeA2(人腺樣囊性細(xì)胞)

大腸桿菌 Escherichia coli毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes

佛羅里達(dá)側(cè)耳 Pleurotus florida釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

C-33 A(人子宮頸細(xì)胞)猴菌

費(fèi)氏中華根瘤菌 Sinorhizobium frediiAsPC-1(人胰腺細(xì)胞)

煙曲霉 Aspergillus fumigatus金色鏈霉菌 Streptomyces aureus

NIH 3T3/小鼠成纖維細(xì)胞Caki-2(人腎透細(xì)胞細(xì)胞)

蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis黑木耳 Auricularia auricula

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

人顱蓋造骨細(xì)胞*培養(yǎng)基毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes