Rosetta-gami B(DE3)

Rosetta-gami B(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼：                                                                    保存條件： -80℃ 產(chǎn)品規(guī)格:


 

Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞基因型：

F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (Camr, Kanr, Tetr)

Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞簡要說明：

Rosetta-gami B(DE3) 菌株聚合了 BL21，Tuner，Origami 和 Rosetta 四種菌株的優(yōu)點： --

＊ lacY1 基因 (半乳糖苷透性酶基因)突變賦予其 Tuner 菌株的優(yōu)點——IPTG 以均一速度進入體系中大腸桿菌的每個 細胞，產(chǎn)生更加嚴格、均一的濃度依賴。--
＊ pRARE 賦予其 Rosetta 菌株的優(yōu)點——補充大腸桿菌缺乏的 6 種稀有密碼子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA) 對應(yīng)的 tRNA，提高外源基因的表達水平。--
* gor522::Tn10 trxB 賦予其 Origami 菌株的優(yōu)點——突變的硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷 胱甘肽還原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它們是還原途徑的兩個關(guān)鍵酶，其突變有利于高效形成正確折疊的 含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。 --
＊ 該菌株染色體整合了λ噬菌體 DE3 區(qū) (DE3 區(qū)含有 T7 噬菌體 RNA 聚合酶)適合 T7 啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達。

＊ --Rosetta-gamiB(DE3)菌株具有卡那霉素，氯霉素，四環(huán)素抗性，由特殊工藝制作，經(jīng) pUC19 質(zhì)粒 檢測轉(zhuǎn)化效率高達 108 cfu/μg DNA。

Rosetta-gami B(DE3)感受態(tài)細胞操作說明:

1. Rosetta-gamiB(DE3)菌株感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA 并用手 EP 管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置 25 分鐘。--
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。--

3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT 或 LB)，混勻后 37℃，200rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。--

4. 5000rpm 離心一分鐘收菌，，留取 100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含 34 µg/ml 氯霉素及所選質(zhì)粒篩選 抗生素的 2YT 或 LB 培養(yǎng)基上。--
5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。--