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當前位置：上海淳麥生物科技有限公司> 供求商機> NCI-H322支氣管肺泡癌細胞
| 種屬: 組織來源: 疾病: 年齡: 性別: 細胞類型: 生長特性: | 人源（Homo sapiens） 肺 （Lung） 支氣管肺泡癌（Bronchioalveolar carcinoma） 52歲（52 years） 男（Male） 表皮細胞（Epithelial） 貼壁生長（Adherent） |
生長條件：氣相：100%空氣；溫度：37℃ 傳代方法：1:2至1:3，每周 3次 凍存條件：無血清細胞凍存液，液氮儲存 支原體檢測：無 NCI-H322支氣管肺泡癌細胞 培養(yǎng)操作 1）復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 2） NCI-H322支氣管肺泡癌細胞細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。 c、按6-8 mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 d、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例； a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞，進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
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