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色譜過程的本質(zhì)是待分離物質(zhì)分子在固定相和流動(dòng)相之間分配平衡的過程,不同的物質(zhì)在兩相之間的分配會(huì)不同,這使其隨流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)速度各不相同,隨著流動(dòng)相的運(yùn)動(dòng),混合物中的不同組分在固定相上相互分離。
根據(jù)物質(zhì)的分離機(jī)制,又可以分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜、親和色譜等類別。
1.原理
分配色譜利用固定相與流動(dòng)相之間對(duì)待分離組分溶解度的差異來實(shí)現(xiàn)分離。分配色譜的固定相一般為液相的溶劑,依靠圖布、鍵合、吸附等手段分布于色譜柱或者擔(dān)體表面。分配色譜過程本質(zhì)上是組分分子在固定想和流動(dòng)相之間不斷達(dá)到溶解平衡的過程。
液液分配色譜用載體主要有硅膠、硅藻土、及纖維素等。通常,分離水溶性成分或極性較大的成分入生物堿、苷類、糖類、有機(jī)酸等化合物時(shí),固定相多采用強(qiáng)極性溶劑,如水、緩沖溶液等,流動(dòng)相則采用、乙酸乙酯、丁醇等弱極性有機(jī)溶劑,稱之為正相色譜;但當(dāng)分離脂溶性化合物時(shí),如高級(jí)脂肪酸、油脂、游離甾體等時(shí)、則兩相可以顛倒,固定相可以用石蠟油,而流動(dòng)相則用水或甲醇等強(qiáng)極性溶劑,故稱之為反相分配色譜。
2.支持劑
常用的有硅膠、硅藻土、纖維素粉、和濾紙等。
常用反相硅膠薄層色譜及柱色譜的填料系將普通硅膠經(jīng)下列方式進(jìn)行化學(xué)修飾,鍵合上長度不同的烴基形成親脂性表面。
3.操作方式
分配薄層層析法是指根據(jù)各種成分在固定相(液)和移動(dòng)相(液)兩相間的分配系數(shù)不同而達(dá)到相互分離的一種色譜法。
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