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CCK-8試劑盒的操作步驟
閱讀：909 發(fā)布時間：2023-3-8CCK-8試劑盒，是用于測定細胞增殖或毒性實驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。
CCK法應(yīng)用非常廣泛，如藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性測驗等。
操作步驟：
1、在96孔板中配置100μl的細胞懸液，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時（在37℃，5%CO2的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測物質(zhì)。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當?shù)臅r間（例如6、12、24或48小時）。
4、向每孔加入10μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時。
6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度，如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。
7、如暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μl0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下，在24小時內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
注意： 如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性，可以加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉影像。 當然影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基加入后的空白吸收即可。