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浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再置于無水酒清中浸泡6小時，再用三蒸水沖洗3遍（個人認為主要目的是將酸沖洗干凈就可以了，如果不干凈的話，細胞帖壁不好），放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進行高壓消毒。高壓后取出放入烤箱中烤干，備用?？靖珊罂煞湃氤瑑襞_中。

4.多聚賴氨酸的使用：

很多人都將玻片用此處理，以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸，細胞貼壁仍然很好，且在做后續(xù)的免疫細胞化學染色、TUNEL等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。

 

細胞爬片的操作

1.胰酶消化細胞后計數(shù)重懸細胞于培養(yǎng)基中。

2.加細胞前，根據(jù)玻片的大小，先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細胞懸液時玻片漂起，造成雙層細胞貼片。(整個過程注意無菌操作)

3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細胞密度接入培養(yǎng)板內即可。

4.待細胞貼壁后，可去上清加含藥培養(yǎng)基。

5.按照實驗設計，作用一定時間后取玻片。取玻片時由于玻片與培養(yǎng)皿底結合較緊，張力較大，一般將注射器針頭針尖向背面弄個小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出就可以了。如果要做諸如24h，48h，72h等這樣時間點的實驗的話，將所需數(shù)量的爬片取出時應用酒精燈火焰燒一下針頭和鑷子。末取出的可接著繼續(xù)培養(yǎng)。

 

細胞爬片的固定

另外在保存細胞爬片的時候，一般用培養(yǎng)皿或板，先在皿底放一層面巾紙，然后再放爬片，這樣方便做實驗時取片。

細胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。當然，有例外，比如做凋亡的TUNEL染色時就避免洗，因為凋亡的細胞在洗的過程中有可能會脫落。

然后蓋上蓋子，并在蓋子上做標記，為避免混淆，可用透明膠帶將蓋子和皿連在一起。一般-20℃保存2-3個月的片子做免疫組化是沒有問題的。