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技術(shù)文章

免疫熒光技術(shù)的特點及原理

閱讀:753          發(fā)布時間:2023-5-9

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique )又稱熒光抗體技術(shù),是標記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。

一、特點:
該技術(shù)的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未解決,結(jié)果判定的客觀性不足,技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。
熒光免疫法按反應(yīng)體系及定量方法不同,還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比,熒光免疫法無放射性污染,并且大多操作簡便,便于推廣。國外生產(chǎn)的TDM用試劑盒,有相當一部分即屬于此類,并且還有TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產(chǎn)。
由于一般熒光測定中的本底較高等問題,熒光免疫技術(shù)用于定量測定有一定困難。新發(fā)展了幾種特殊的熒光免疫測定,與酶免疫測定和放射免疫分析一樣,在臨床檢驗中應(yīng)用。

二、原理:
免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性,所以當抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時,只要知道其中的一個因素,就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上,與其相應(yīng)的抗原(或抗體)結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。

直接法
將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經(jīng)一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢。

間接法
如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異抗體(第一抗體)與抗原標本進行反應(yīng),用水洗去未反應(yīng)的抗體,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應(yīng),使之形成抗體—抗原—抗體復(fù)合物,再用水洗去未反應(yīng)的標記抗體,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為第一抗體,其它步驟的抗原檢查相同。
標記的抗抗體是抗球蛋白抗體,同于血清球蛋白有種的特異性,如免疫抗雞血清球蛋白只對雞的球蛋白發(fā)生反應(yīng),因此,制備標記抗體適用于任何抗原的診斷。

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