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大鼠核因子?b(NF-?b)酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書

閱讀:590          發(fā)布時間:2020-5-9
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使用前仔細閱讀本說明書酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測大鼠核因子?b (NF-?b),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學診斷。

    用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中核因子?b (NF-?b)測定。

工作原理:

本試劑盒采用的生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法ELISA)測定樣品中大鼠核因子?b (NF-?b)水平。向預先包被了大鼠核因子?b (NF-?b)單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠核因子?b (NF-?b),溫育;溫育后,加入生物素標記的抗核因子?b (NF-?b)抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠核因子?b (NF-?b)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成 

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標準品2400 ng/L

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標準品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素標記的抗NF-?B抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37恒溫箱。
  • 標準規(guī)格酶標儀。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

注意事項:

  • 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  • 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差
  • 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
  • 免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜
  • 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  • 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

 

洗板方法:

1.手工洗板方法:甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。

2.自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

 

標本要求: 

1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但避免反復凍融。

 

操作程序:

  • 標準品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

1200ng/L

5號標準品

120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液

600ng/L

4號標準品

120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液

300ng/L

3號標準品

120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液

150ng/L

2號標準品

120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液

75ng/L

1號標準品

120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

  • 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔。
  • 加樣:1) 空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗NF-?B抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)待測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗NF-?B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。 
  • 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  • 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
  • 根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。

 

操作程序總結(jié):

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上

2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和15%

 

檢測范圍:

檢測范圍:50ng/L  1400ng/L

 

保存條件及有效期:

保存:2-8

有效期:6個月(2-8℃)。

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