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當(dāng)前位置:南京億迅生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>你知道單克隆抗體和多克隆抗體的區(qū)別嗎?
一、什么是抗體?
機(jī)體受抗原刺激后,由淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞(主要是B淋巴細(xì)胞分化后的漿細(xì)胞)產(chǎn)生具有特異性免疫功能球蛋白,即抗體??贵w蛋白是一個由四條多肽鏈(兩條重鏈,兩條輕鏈)而組成的Y型分子。該Y型結(jié)構(gòu)的兩個頂端處各含有一個抗體結(jié)合部位(paratope, 可以理解成是一把“鎖“)。每一種抗體結(jié)合部位可以特定地結(jié)合一種抗原表位(epitope, 可以理解成針對某一把“鎖"的 “鑰匙")。抗體結(jié)合表位與抗原表位這種特異對應(yīng)關(guān)系是抗體與抗原高特異性結(jié)合的基礎(chǔ)??贵w在醫(yī)藥研發(fā)中有非常廣泛的應(yīng)用。目前主要有兩大類的抗體:單克隆抗體(monoclonal antibody, Mabs)和多克隆抗體(polyclonal antibody, Pabs)
二、單克隆抗體和多克隆抗體有什么區(qū)別?
1.定義的區(qū)別:
克隆:指無性繁殖,即由同一個祖先細(xì)胞分裂繁殖而形成的純細(xì)胞系,該細(xì)胞系中每個細(xì)胞的基因彼此相同。
單克隆抗體(monoclonal antibody,mAb):是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體,稱為單克隆抗體。
多克隆抗體(polyclonal antibody, pAb):顧名思義,由多種抗原決定簇刺激機(jī)體,相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混在一起就是多克隆抗體。簡言之,多克隆抗體就是用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物,刺激機(jī)體多個B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的不同抗體的混合物。
2.性質(zhì)上的區(qū)別:
特異性:
多克隆抗體猶如許多單克隆抗體的集合,它們有的特異性高,有的特異性低,總體特異性符合正態(tài)分布曲線的形式,而其特異性的總體表現(xiàn)也應(yīng)處于統(tǒng)計學(xué)正態(tài)曲線中位線(MID)的水平。而單抗制備后續(xù)的篩選過程,可去除大部分的非特異抗體,保留幾株特異性較好的單克隆抗體。
一般而言,單克隆抗體具有更高的特異性。多抗特異性可通過生產(chǎn)環(huán)節(jié)比如使用高純度的免疫原,以及使用提純的靶點(diǎn)蛋白對多抗進(jìn)行免疫親和層析純化等方法得以改進(jìn)。經(jīng)過免疫親和層析的多抗其總體特異性將大大提升,與單抗相比已相差無幾。
交叉反應(yīng):
抗原與抗體結(jié)合的特異性,是指某一抗原表位與相應(yīng)抗體結(jié)合的特異性。這種結(jié)合的分子機(jī)制是抗原表位的空間結(jié)構(gòu)與抗體分子超變區(qū)互補(bǔ)的結(jié)果。而交叉反應(yīng)是指兩種抗原分子表面存在有相同或相似的抗原表位時,與同一種抗體結(jié)合的現(xiàn)象。因此,交叉反應(yīng)實(shí)質(zhì)上也是抗原與抗體的特異性結(jié)合。
單克隆抗體僅針對目標(biāo)抗原某一特定抗原表位,特異性高,存在有相同或相似的抗原表位幾率低,出現(xiàn)交叉反應(yīng)的幾率也就低。
多克隆抗體針對目標(biāo)抗原多個抗原表位,特異性低,具有生物物理多樣性,存在有相同或相似的抗原表位幾率高,出現(xiàn)交叉反應(yīng)的幾率也就較高。
假陽性:
根據(jù)抗體最核心的表位結(jié)合區(qū)域—互補(bǔ)決定區(qū)(Complementarity Determining Region,CDR)的結(jié)構(gòu),抗體通??梢跃o密結(jié)合的抗原表面區(qū)域或表位面積很小,對于變性的肽段約在4-8個Aa以內(nèi),以及5-7個單糖的糖鏈或6-8個核苷酸的核酸。通過肽段BLAST可以得知,小肽段序列相同的情況將在很多不同蛋白上發(fā)生。這意味著單抗識別的這個表位可能并不僅僅屬于靶標(biāo)蛋白本身,也即意味著,即使利用純化抗原蛋白進(jìn)行了特異性篩選的單克隆抗體,當(dāng)用其檢測復(fù)雜樣本時,也將面臨交叉反應(yīng)或假陽性問題。
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