耐堿性蛋白A瓊脂糖凝膠 rat-ProteinA Berpharose FF 層析柱
耐堿性蛋白A瓊脂糖凝膠FF

（rat-Protein ABerpharoseFF）

1.產(chǎn)品介紹

同普通蛋白A瓊脂糖凝膠相比，耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF大大提高了凝膠的耐堿性，可以使用0.1-0.5MNaOH溶液去除熱源或?qū)δz進(jìn)行清洗。瓊脂糖凝膠骨架上的延伸碳臂和重組耐堿蛋白A上的定向結(jié)合位點的設(shè)計保證了兩者之間的定向牢固鍵合以及耐堿蛋白A同抗體間的高效親和能力。

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、25ml、100ml、500ml、1L 純化流程

應(yīng)用舉例：

結(jié)合緩沖液：20mM磷酸緩沖液、150mMNaCl、pH7.0

洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸，PH3.0或0.1M檸檬酸緩沖液，pH 4.0

中和緩沖液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

1） 1ml耐堿蛋白A瓊脂糖凝膠FF預(yù)裝柱用5-10個柱床體積的蒸餾水洗去保存液。

2）用結(jié)合緩沖液平衡5-10個柱床體積。

3）將5ml人多抗血清用結(jié)合緩沖液稀釋到50ml，0.45μm濾膜過濾上樣。

4）用結(jié)合緩沖液再洗5-10個柱床體積。

5）用洗脫緩沖液洗脫抗體，收集洗脫峰，并用中和緩沖液調(diào)節(jié)其pH至中性。

6）每次使用后依次使用3個柱體積的結(jié)合緩沖液，5個柱體積的去離子水，5個柱體積的20%的乙醇平衡保存，防止填料被細(xì)菌污染。

7） SDS-PAGE電泳分析。

6.注意事項

1）樣品洗脫后一般pH很低，應(yīng)立刻用堿性中和緩沖液（如1MTris-HCl，pH8.5）將收集到的抗體溶液中和到中性，或在收集容器中事先裝5-10%、pH7.5的緩沖液（如1MTris-HCl或1M磷酸緩沖液），以利于維持抗體的生物活性，避免抗體失活。

2）使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

3）填料再生清洗：隨著一些變性物質(zhì)的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結(jié)合載量下降，嚴(yán)重影響純化效果，這時需要對填料進(jìn)行再生清洗（如下步驟）：先用3倍柱體積的結(jié)合緩沖液清洗，然后用至少2倍柱體的0.1-0.5 M NaOH清洗，接觸時間為15 min，最后用5倍柱體積的結(jié)合液沖洗。（注：因0.1–0.5 M NaOH粘度大易造成壓力增加，可進(jìn)行反向沖洗。）

4）本產(chǎn)品保存條件：20%乙醇，4-8℃。


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