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重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)能夠在 恒溫條件下(37℃-42℃)實(shí)現(xiàn)對(duì)核酸的快速特異性擴(kuò)增，且在20min內(nèi)可將核酸擴(kuò)增至可檢 測(cè)水平，具有良好的可操作性，能夠在非實(shí)驗(yàn)室條件下完成核酸檢測(cè)，被稱為是具有可替代PCR潛力的核酸檢測(cè)技術(shù)，且可以和瓊脂糖凝膠檢測(cè)、熒光檢測(cè)技術(shù)結(jié)合實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)、快速甚至定量檢測(cè)。常溫等溫，是指維持在某一特定的溫度，溫度為22-42℃，接近常溫，溫度保持恒定，因?yàn)檫@種反應(yīng)對(duì)設(shè)備的要求比較低，更適合應(yīng)用于POCT或者即時(shí)診斷。

常規(guī)的RPA檢測(cè)試劑需低溫保存、運(yùn)輸，并且反復(fù)凍融會(huì)影響性能的穩(wěn)定。因此，開(kāi)發(fā)常溫下穩(wěn)定保存、便于運(yùn)輸?shù)脑嘡PA劑至關(guān)重要。將RPA檢測(cè)試劑制備成為凍干試劑是解決上述問(wèn)題的可行思路。然而，RPA與CRISPR檢測(cè)試劑是一種成分復(fù)雜的組合物，特別是凍干的RPA試劑與凍干的CRISPR試劑再反應(yīng)過(guò)程中會(huì)混合為一個(gè)體系，其成分進(jìn)一步復(fù)雜化，包含DNA、RNA和酶、凍干成分等物質(zhì)。因而，在開(kāi)發(fā)具體的檢測(cè)試劑過(guò)程中，如何改進(jìn)凍干試劑的組成，特別是如何設(shè)置凍干保護(hù)劑的組成，進(jìn)而保證檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性，避免其性能降低，這是一個(gè)重要的問(wèn)題。

RPA試劑包含緩沖液，重組酶、DNA 聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、dNTP 、ATP和PEG 35000等。在常溫下實(shí)現(xiàn)反應(yīng)。

   1. 緩沖液：緩沖液是RPA試劑中常見(jiàn)的成分之一，它有助于維持反應(yīng)體系的pH值穩(wěn)定，從而確保反應(yīng)的準(zhǔn)確性和可靠性。

2. 酶：酶是RPA試劑中的關(guān)鍵成分，包含重組酶，DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶等，它們負(fù)責(zé)催化特定的化學(xué)反應(yīng)。

3. 引物：引物是用于PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）等反應(yīng)的特異性DNA片段，它們幫助擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列。包括一對(duì)或者多對(duì)引物。

4. 熒光染料：用于實(shí)時(shí)PCR等需要熒光檢測(cè)的技術(shù)中，幫助實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。

由于RPA試劑包含多重成分，成分復(fù)雜，如各種酶，相互耐受溫度，環(huán)境都不一樣，保存條件很苛刻，而凍干成為解決保存的方法之一。凍干法是采用低溫升華的方法，這種情況下不改變物質(zhì)的特性，降低到很低的含水量，鎖住物質(zhì)本身的活性，復(fù)溶后恢復(fù)活性，獲得液體狀態(tài)下或者物質(zhì)本身的新鮮狀態(tài)。而RPA試劑凍干不同于常規(guī)的PCR試劑，由于其成分復(fù)雜，因此凍干保護(hù)劑和凍干曲線需要摸索。我公司在開(kāi)發(fā)過(guò)程中建立了各種試劑的凍干保護(hù)體系和凍干曲線，購(gòu)買任意一款硅油循環(huán)凍干機(jī)，我公司都可以提供免費(fèi)的凍干技術(shù)協(xié)助。歡迎資料RPA凍干試劑凍干設(shè)備，凍干微球成型儀，微球分裝機(jī)。