應(yīng)用簡(jiǎn)介
       糖尿病(diabetes mellitus ,DM)已成為嚴(yán)重危害人類健康的公共衛(wèi)生問(wèn)題。DM及其并發(fā)癥不僅嚴(yán)重影響糖尿病患者的生活質(zhì)量,同時(shí)也是致殘、致死的重要原因。因此,建立合適的糖尿病動(dòng)物模型,闡明DM及其并發(fā)癥的發(fā)病機(jī)制就顯得尤為重要。
大鼠糖尿病模型
       一般糖尿病動(dòng)物模型制備方法主要有:手術(shù)切除胰腺、化學(xué)藥物誘導(dǎo)、自發(fā)性糖尿病動(dòng)物模型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等。此方法為化學(xué)藥物誘發(fā)的DM模型：采用鏈脲佐菌素腹腔注射可誘發(fā)DM，鏈脲佐菌素(streptozotocin STZ)的參考劑量為50～150mg/kg。STZ是一種含亞硝基的化合物,進(jìn)入體內(nèi)可通過(guò)以下機(jī)制特異性地破壞胰島β細(xì)胞:
       (1) STZ直接破壞胰島β細(xì)胞:主要見(jiàn)于注射大劑量STZ后。STZ注射后可引起β細(xì)胞內(nèi)輔酶I(NAD)的濃度下降,NAD依賴性能量和蛋白質(zhì)代謝停止,導(dǎo)致β細(xì)胞死亡;
       (2) 通過(guò)誘導(dǎo)一氧化氮(NO)的合成,破壞胰島β細(xì)胞;
       (3)STZ激活自身免疫過(guò)程,進(jìn)一步導(dǎo)致β細(xì)胞的損害:小劑量注射STZ可破壞少量胰島β細(xì)胞,死亡的胰島β細(xì)胞可作為抗原被巨噬細(xì)胞吞噬,產(chǎn)生TH1刺激因子,使TH1細(xì)胞系占優(yōu)勢(shì)而產(chǎn)生IL-2及IFN-γ,在胰島局部促使炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并活化釋放IL-1、TNF-α、IFN-γ、NO和H2O2等物質(zhì)殺傷細(xì)胞。死亡細(xì)胞又可作為自身抗原,再次遞呈給抗原遞呈細(xì)胞進(jìn)行處理,釋放細(xì)胞因子,放大細(xì)胞損傷效應(yīng),最終誘發(fā)DM。
實(shí)驗(yàn)方法
       主要試劑及配制方法：
       檸檬酸、檸檬酸三鈉、鏈脲佐霉素(Streptozocin, STZ)
       1. 檸檬酸鈉緩沖液配制：將2.10 g檸檬酸加入雙蒸水100 ml配成檸檬酸母液， 稱為A液； 將2.94g檸檬酸三鈉加入雙蒸水100 ml配成檸檬酸鈉母液，稱為B液； 將A、B液按1:1.32比例混合，pH計(jì)測(cè)定pH值，調(diào)定溶液pH=4.0，即是所需配制STZ的0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液。
       2. STZ溶液的配制：將STZ溶于0.1 mol/L檸檬酸鈉緩沖液中，新鮮配制成10 mg/mL濃度的STZ溶液，并用0.22μm濾菌器過(guò)濾除菌。注意避光配制，現(xiàn)用。
實(shí)驗(yàn)流程：