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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù) ELISA是指以酶作為標(biāo)記物、以抗原和抗體之間免疫結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的固相吸附測(cè)定方法。
詳細(xì)介紹
ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)簡(jiǎn)介
ELISA是指以酶作為標(biāo)記物、以抗原和抗體之間免疫結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的固相吸附測(cè)定方法。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，不同指標(biāo)操作不一樣。具體以訂購(gòu)的試劑盒說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。基本步驟如下：
1.包被：用碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1-10μg/ml。在聚苯乙烯酶標(biāo)板的每孔加100μl，4℃過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3min。(一般商品化的試劑盒中已包被好抗體，此步驟可省略)
2.封閉：每孔加入200ul封閉液，37℃或室溫孵育1-2 h。
3.洗滌：小心揭掉封板膜，放入洗板機(jī)，洗滌3-5遍。也可以手動(dòng)洗板：棄去液體，每孔加入300ul洗液，浸泡1-2min，在吸水紙上拍干，重復(fù)3-5遍。(一般商品化的試劑盒中已包被好抗體，前三個(gè)步驟可省略)
4.加樣：加適當(dāng)稀釋的待檢樣品100μl于上述已包被的反應(yīng)孔中。(同時(shí)做空白孔，倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品孔，有條件可加做陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔作為質(zhì)控點(diǎn))。
5.溫育：用封板膜封板后置37℃孵育1-2 h。
6.洗滌：同步驟3。
7.加抗體：于各孔中加稀釋好的生物素化抗體工作液100 μl。
8.溫育：用封板膜封板后置37℃孵育1 h。
9.洗滌：同步驟3。
10.加酶結(jié)合物：于各孔中加稀釋好的酶結(jié)合物工作液100 μl。
11.溫育：用封板膜封板后置37℃避光孵育30 min。
12.洗滌：同步驟3。
13.加顯色底物：于各孔中加入TMB底物溶液100 μl，37℃避光反應(yīng)10～30min，直到倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)明顯的顏色梯度為止。
14.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸100 μl，顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
15.結(jié)果測(cè)定：10min內(nèi)，在酶標(biāo)儀上，于450nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值。
ELISA酶聯(lián)免疫反應(yīng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)內(nèi)容
服務(wù)內(nèi)容 | 結(jié)果內(nèi)容 | 備注 |
ELISA檢測(cè) | 原始數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)報(bào)告（包括實(shí)驗(yàn)流程、材料和方法等）、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 | 可測(cè)血清、血漿、尿液、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清等 |
客戶須知
ELISA試劑盒自備（建議定購(gòu)*試劑盒，也可委托我們代購(gòu)）。
實(shí)驗(yàn)周期
7個(gè)工作日內(nèi)（具體實(shí)驗(yàn)周期視實(shí)驗(yàn)方案而異）
服務(wù)承諾
提供實(shí)驗(yàn)方法、步驟、所用試劑、儀器及相關(guān)分析數(shù)據(jù)。