1 -蒽腈( 1 an t hr oy l n i t r i l e, 1 -AN ）

T2毒素衍生1-氰酸蒽標(biāo)準(zhǔn)品1-蒽腈1-AN 100mg

提供t2毒素檢測耗材，以及解決方案。符合國標(biāo)5009.118-2016

*法 免疫親和層析凈化液相色譜法
2 原理 用提取液提取試樣中的T2毒素,經(jīng)免疫親和柱凈化、衍生后,用高效液相色譜熒光檢測器測定,外 標(biāo)法定量。 3 試劑和材料 除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。 3. 1 試劑 3. 1. 1 甲醇( CH3OH):色譜純。 3. 1. 2 乙腈( CH3CN):色譜純。 3. 1. 3 甲苯( C 6H5CH3):色譜純。 3. 1. 4 4 -二甲基氨基吡啶。 3. 1. 5 1 -蒽腈( 1 an t hr oy l n i t r i l e, 1 -AN)。 3. 2 試劑配制 3. 2. 1 提取液:甲醇-水( 8∶2,體積比)。 3. 2. 2 4 -二甲基氨基吡啶溶液:準(zhǔn)確稱取0. 0325g4 -二甲基氨基吡啶于100mL容量瓶中,用甲苯定容 至刻度。 3. 2. 3 1 -蒽腈溶液:準(zhǔn)確稱取0. 030g1 -蒽腈于100mL容量瓶中,用甲苯定容至刻度。 3. 3 標(biāo)準(zhǔn)品 T2毒素( C 24H34O9, CAS號(hào): 21259 20 1):純度≥98. 0%,或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo) 準(zhǔn)物質(zhì)。 3. 4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 3. 4. 1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱取適量的T2毒素標(biāo)準(zhǔn)品(精確至0. 0001g),用乙腈溶解,配制成濃度為
GB5009. 118—2016
2  100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,-18℃以下避光保存。 3. 4. 2 標(biāo)準(zhǔn)工作液:根據(jù)需要準(zhǔn)確吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用乙腈稀釋,配制成5ng/mL、 10ng/mL、 50ng/mL、 100ng/mL、 200ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液, 4℃避光保存。 3. 5 材料 3. 5. 1 T2毒素免疫親和柱:柱規(guī)格1mL或3mL,柱容量≥1500ng,或等效柱。 3. 5. 2 玻璃纖維濾紙:直徑11cm,孔徑1. 5μm,無熒光特性。 4 儀器和設(shè)備 4. 1 高效液相色譜儀:配有熒光檢測器。 4. 2 高速粉碎機(jī):轉(zhuǎn)速≥12000r /mi n。 4. 3 均質(zhì)器:轉(zhuǎn)速≥12000r /mi n。 4. 4 氮吹儀。 4. 5 離心機(jī)。 4. 6 渦旋混合儀。 4. 7 空氣壓力泵。 4. 8 試驗(yàn)篩:孔徑1. 0mm。 4. 9 天平:感量0. 0001g和0. 01g。 4. 10 超聲波發(fā)生器:功率>180W。 4. 11 玻璃注射器: 10mL。 5 分析步驟 5. 1 提取 5. 1. 1 糧食及糧食制品 將樣品研磨,硬質(zhì)的糧食等用高速粉碎機(jī)磨細(xì)并通過試驗(yàn)篩。稱取25. 0g(精確到0. 1g)試樣于燒 杯中,用提取液溶解,轉(zhuǎn)移至容量瓶中,用提取液定容至100mL,混勻,渦旋振蕩提取10mi n,定量濾紙 過濾。移取10. 0mL濾液加入40mL水稀釋混勻,經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,濾液備用。 5. 1. 2 醬油、醋、醬及醬制品 稱取25. 0g(精確到0. 1g)混勻的試樣,用甲醇定容至50. 0mL,超聲提取10mi n,定量濾紙過濾。 移取10. 0mL濾液加入40mL水稀釋混勻,經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,濾液備

5. 1. 3 酒類 取脫氣酒類試樣(含二氧化碳的酒類使用前先置于4℃冰箱冷藏30mi n,過濾或超聲脫氣)或其他 不含二氧化碳的酒類試樣20. 0g(精確到0. 1g)于50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,定量濾紙 過濾。移取10. 0mL濾液加入40mL水稀釋,經(jīng)玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,濾液備用。 5. 2 凈化和洗脫 將免疫親和柱連接于玻璃注射器下,準(zhǔn)確移取10. 0mL5. 1中的提取濾液,注入玻璃注射器中。將 空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s的流速緩慢通過免疫親和柱,直至空氣進(jìn)入親和柱中。用10mL水淋洗親和柱,流速為1滴/s~2滴/s,直至空氣進(jìn)入親和柱中,棄去全部流出 液,抽干小柱。準(zhǔn)確加入1. 0mL甲醇洗脫,流速約為1滴/s,收集洗脫液。 5. 3 衍生 5. 3. 1 標(biāo)準(zhǔn)工作液的衍生:取不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液各1mL,在50℃ 下用氮?dú)獯蹈?加入50μL4 -二 甲基氨基吡啶溶液和50μL1 -蒽腈溶液,在渦旋混合器上混勻1mi n, 50℃反應(yīng)15mi n,在冰水中冷卻 10mi n后取出, 50℃下氮?dú)獯蹈?用1. 0mL流動(dòng)相溶解,待HPLC測定。 5. 3. 2 樣品的衍生:將5. 2中洗脫液在50℃下用氮?dú)獯蹈?按5. 3. 1步驟進(jìn)行。 5. 4 測定 5. 4. 1 高效液相色譜參考條件 高效液相色譜參考條件列出如下: a) 色譜柱: C 18柱,柱長150mm,內(nèi)徑4. 6mm,粒徑5μm,或等效柱; b) 流動(dòng)相:乙腈-水( 75∶25,體積比); c) 流速: 1. 0mL/mi n; d) 檢測波長:激發(fā)波長381nm,發(fā)射波長470nm; e) 進(jìn)樣量: 20μL; f) 柱溫: 35℃。 5. 4. 2 色譜測定 在5. 4. 1色譜條件下,將系列T2毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液按濃度。

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