產(chǎn)品名稱：HeLa細(xì)胞專用培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-G193

培養(yǎng)體系：MEM+10%FBS+1%P/S

產(chǎn)品規(guī)格：500mL / 200mL / 125mL

產(chǎn)品形態(tài)：液體

生物安全檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)陰性

內(nèi)毒素含量：＜10 EU/mL

儲(chǔ)存條件：2-8℃，避光儲(chǔ)存

運(yùn)輸條件：冰袋冷藏運(yùn)輸

有效期：3 months

這種培養(yǎng)基 TCH-G193 由Cas9X海星生物技術(shù)團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，可保持HeLa細(xì)胞理想的生長狀態(tài)。本產(chǎn)品已包含HeLa細(xì)胞生長的各種成分，無需額外添加，可直接用于HeLa細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

(1) 本產(chǎn)品含有血清和雙抗，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可以直接使用。

(2) 使用前請(qǐng)將產(chǎn)品提前置于室溫或37°C充分預(yù)熱。

(3) 使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無菌操作，避免污染。

(4) 使用產(chǎn)品時(shí)請(qǐng)做好個(gè)人防護(hù)。

(5) 為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果，不宜將其長時(shí)間放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

(6) 所有產(chǎn)品請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用，超出保質(zhì)期，請(qǐng)放棄使用。

HeLa細(xì)胞復(fù)蘇及傳代培養(yǎng)簡要實(shí)驗(yàn)步驟如下：

細(xì)胞培養(yǎng)試劑：DMEM培養(yǎng)基，胎牛血清，青霉素，鏈霉素，0.25%胰蛋白酶（含0.02%的EDTA），PBS等

細(xì)胞培養(yǎng)耗材：T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶、移液槍吸頭、50ml離心管、15ml離心管、細(xì)胞計(jì)數(shù)板。

實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備:二氧化碳振蕩培養(yǎng)箱、 光學(xué)顯微鏡、瑞寧移液器、 超凈臺(tái)、 恒溫水浴鍋、酒精燈，-80冰箱，液氮罐，低溫冷凍存儲(chǔ)箱。

HeLa細(xì)胞復(fù)蘇步驟：

凍存液： 含10%血清的培養(yǎng)基和5％-10% DMSO

取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞， 精胰酶消化后加入適量凍存液，用吸管吹打制成 細(xì)胞懸液（1×106 ~5×106細(xì)胞/ml），加入1ml細(xì)胞于凍存管中，密封后標(biāo)記細(xì)胞名稱和冷凍日期。

復(fù)蘇細(xì)胞是從零下80℃冰箱或液氮罐中取出凍存管，迅速投入37℃水浴中，使其融化（1分鐘左右），用培養(yǎng)集緩慢稀釋至原體積的10倍以上，大部分細(xì)胞貼壁后（4~6小時(shí)），吸取含有凍存液的培養(yǎng)基，并換成完培。

HeLa細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 從零下80℃冰箱或者液氮罐中取出冷凍管，迅速投入37℃水浴中，使其融化（1分鐘左右）。

2．培養(yǎng)基緩慢稀釋至原體積的10倍以上。

3.低速離心10分鐘，吸去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基培養(yǎng)剛復(fù)蘇的細(xì)胞。

HeLa細(xì)胞傳代實(shí)驗(yàn)步驟：

取密度80％左右的Hela細(xì)胞，吸去舊的培養(yǎng)基，用PBS或者Trypsin消化液潤洗細(xì)胞以減少殘留的血清對(duì)Trypsin的抑制作用。

吸去PBS或者Trypsin，加入Trypsin消化液，于37℃消化2～4分鐘，于倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞之間出現(xiàn)間時(shí)或者變圓時(shí)，吸掉Trypsin消化液。   加入適量HeLa細(xì)胞培養(yǎng)基 ，用移液器上下吹打數(shù)次打散細(xì)胞團(tuán)塊以盡可能形成單細(xì)胞懸液，吹打均勻后，按照稀釋比例轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)充完培并以正常培養(yǎng)條件培養(yǎng)。