會(huì)員.png)
5
當(dāng)前位置：昆山伯利克精密儀器有限公司>>技術(shù)文章>>引物合成儀溶解和保存引物的方式
引物合成儀溶解和保存引物的方式
引物合成儀合成步驟：
1、脫掉附加在CPG擔(dān)體上的第一個(gè)堿基5' -OH基團(tuán)上的保護(hù)基 (DMTr)，準(zhǔn)備附加下一個(gè)新的堿基；
2、活化新的堿基單體，準(zhǔn)備與第一個(gè)堿基進(jìn)行反應(yīng)；
3、第二個(gè)堿基與第一個(gè)堿基發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)；
4、將沒有反應(yīng)的第一個(gè)堿基的5' -OH加帽封死 ，使其不再進(jìn)一步參與反應(yīng)；
5、將核苷亞磷酸酯氧化成更穩(wěn)定的核苷磷酸酯 (即將三價(jià)磷氧化成五價(jià)磷)。
6、重復(fù)進(jìn)行1～5的循環(huán)，直至合成完所需的Oligo DNA序列。
7、合成結(jié)束后，將Oligo DNA分子從CPG上切下，再進(jìn)行進(jìn)一步的純化。
引物合成儀溶解和保存引物的方式：
干燥后的引物質(zhì)地非常疏松，開蓋前最好離心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底。根據(jù)計(jì)算出的體積加入去離子無菌水或 10mM Tris pH7.5 緩沖液，室溫放置幾分鐘，振蕩助溶，離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因?yàn)橛行┱麴s水的 pH 值比較低（ pH4-5 ） , 引物在這種條件下不穩(wěn)定。
引物合成后，經(jīng)過一系列處理和純化步驟，旋轉(zhuǎn)干燥而成片狀物質(zhì)。引物在溶解前，室溫狀態(tài)下可以長(zhǎng)期保存。溶解后的引物 -20 度可以長(zhǎng)期保存。如果對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性要求較高，合成的 OD 數(shù)較大，建議分裝，避免反復(fù)凍融。修飾熒光引物需要避光保存。
