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細胞增殖科研實驗技術服務介紹
閱讀:49 發(fā)布時間:2024-9-18
應用簡介
細胞增殖是生物體的重要生命特征,細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物,以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細胞生物,以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞,用來補充體內衰老或死亡的細胞。
檢測方法
MTT,CCK-8,BrdU,EdU等方法是常見的細胞增殖檢測技術,分別從代謝活性和DNA合成的角度來反應細胞的增殖情況。MTT和CCK-8檢測原理為活細胞線粒體中的一些脫氫酶能使檢測試劑還原為甲瓚,而死細胞無此功能。BrdU和EdU則能都在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復制的DNA分子,通過基于與熒光染料的特異性反應檢測DNA復制活性。
MTT技術原理
活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值,在一定細胞數(shù)范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值),來判斷活細胞數(shù)量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越?。?br/>
實驗方法
1、鋪板密度不合理,均勻度不一致;
2、實驗分組不嚴謹;
3、實驗設置時間點不合理;
4、MTT或CCK8加樣時注意事項不明確;
5、血清等影響:高濃度血清或藥物顏色會影響試驗孔的吸光度值;
6、邊緣效應:邊緣孔的水分揮發(fā)較快,藥物易被濃縮。