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shRNA載體構(gòu)建科研實驗技術(shù)服務(wù)介紹
閱讀:42 發(fā)布時間:2024-9-26shRNA載體構(gòu)建
技術(shù)原理
首先設(shè)計根據(jù)需求設(shè)計shRNA引物一套,完成引物退火。將載體進(jìn)行雙酶切反應(yīng),雙酶切后割膠回收。將shRNA和雙酶切回收后的載體,使用試劑盒進(jìn)行重組成環(huán)狀片段,轉(zhuǎn)入制備好的細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞,對長出的單克隆菌落送測序公司進(jìn)行測序鑒定,比對正確的克隆即為構(gòu)建成功的shRNA表達(dá)載體。
shRNA的靶點選擇決定著對靶向基因的表達(dá)敲低效果,通常涉及3-4個shRNA靶點同時進(jìn)行實驗,根據(jù)后續(xù)檢測結(jié)果確定最佳靶點后,安排后續(xù)實驗。
實驗方法
體內(nèi)抑制效果強(qiáng):
shRNA表達(dá)載體生物體內(nèi)的抑制效果強(qiáng)于普通合成的siRNA,且能與組織特異性定位啟動子協(xié)同作用。
誘導(dǎo)表達(dá)功能:
科研人員可以通過shRNA表達(dá)載體服務(wù)建立可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),控制siRNA的表達(dá)。
轉(zhuǎn)染細(xì)胞易富集:
載體上可附加抗生素抗性,篩除未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,輕松富集有沉默潛力的細(xì)胞。
干擾效果長期有效:
shRNA表達(dá)載體能幫助研究人員獲得穩(wěn)定細(xì)胞系,并保證RNA干擾的長期性。
實驗操作簡便:
shRNA表達(dá)載體將以質(zhì)粒的形式寄給客戶,這種形式比一般合成的siRNA更加穩(wěn)定,操作也更加簡單。同時,由于載體可重復(fù)操作,客戶使用更加方便。
優(yōu)惠的價格:
shRNA表達(dá)載體的可重復(fù)操作性降低了其高通量應(yīng)用的價格,滿足了siRNA客戶的大量需求。
可用于基因治療:
構(gòu)建在病毒載體上的shRNA能被應(yīng)用于感染基因治療核心細(xì)胞系。