產(chǎn)品分類品牌分類
-
真空泵 空氣發(fā)生器 氫空一體機(jī) 氮?dú)淇找惑w機(jī) 溶液干燥機(jī) SPE快速前處理 光降解反應(yīng)儀 中藥二氧化硫殘留量檢測儀 消化爐 光化學(xué)反應(yīng)儀 旋渦混勻器 水質(zhì)硫化物酸化吹氣儀 微波消解儀 石墨消解儀 中藥二氧化硫測定儀 重要二氧化硫測定儀 氫氣發(fā)生器 氮?dú)獍l(fā)生器 凱式定氮儀 小型閉式循環(huán)噴霧干燥機(jī) COD消解儀 脂肪測定儀 索氏提取器 氮吹儀 一體化全自動(dòng)蒸餾儀 固相萃取裝置 粗纖維測定儀 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 小型霉菌培養(yǎng)箱系列 實(shí)驗(yàn)室噴霧干燥機(jī) 無菌均質(zhì)器
無菌檢測儀不使用集菌儀和使用集菌儀的差別
OOS(outofspecification,超限度、超規(guī)格)結(jié)果,是指產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)測試中超出已經(jīng)建立的可接受標(biāo)準(zhǔn)的單個(gè)或一系列結(jié)果。無菌產(chǎn)品的陽性結(jié)果、微生物限度試驗(yàn)超出行動(dòng)值或超過規(guī)格、內(nèi)毒素試驗(yàn)結(jié)果超標(biāo)準(zhǔn)等均為OOS結(jié)果《中國藥典》2015年版m和新版《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(GMP)增加了OOS調(diào)查章節(jié),對微生物實(shí)驗(yàn)室00S結(jié)果的調(diào)查做出了較為詳細(xì)的闡述和實(shí)例分析,要求任何OOS結(jié)果必須按照書面規(guī)程進(jìn)行完整的調(diào)查。因?yàn)橹挥写_定了OOS結(jié)果產(chǎn)生的原因并判定其是否有效,進(jìn)而才能制訂完善的預(yù)防和整改措施,以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,實(shí)驗(yàn)室建立OOS調(diào)查處理程序,對OOS結(jié)果進(jìn)行科學(xué)、及時(shí)、有效的調(diào)查分析處理是十分必要的微生物在自然環(huán)境中無處不在,并可能會(huì)隨檢驗(yàn)人員、檢驗(yàn)用器材以及檢品的包裝容器進(jìn)入檢驗(yàn)環(huán)境。因此,關(guān)于微生物檢驗(yàn)中藥品的無菌檢査項(xiàng)目,新版藥典對其操作環(huán)境提出了更高要求,新版GMP也加強(qiáng)了對無菌操作環(huán)境空氣微生物、表面微生物以及人員手套和操作服表面微生物的監(jiān)測頻率,并做出了明確規(guī)定。而對于無菌檢査OOS結(jié)果的調(diào)査,需核實(shí)的相關(guān)記錄和影響因素更為繁雜?;谒膹?fù)雜性,OOS結(jié)果的調(diào)查須追溯到實(shí)驗(yàn)過程的每一個(gè)環(huán)節(jié),而對于它的變異性,調(diào)查過程又需針對不同的OOS結(jié)果著重分析調(diào)查相應(yīng)的不同環(huán)節(jié)。
對于微生物實(shí)驗(yàn)室OOS的調(diào)查,局限于每個(gè)檢驗(yàn)單位的技術(shù)水平和資源,同樣限于人類對微生物掌握的局限,不是每次的OOS調(diào)査都可以發(fā)現(xiàn)其根本原因,但通過此調(diào)査過程仍能夠幫助調(diào)查者找出超標(biāo)結(jié)果發(fā)生的可能原因并進(jìn)而采取糾正預(yù)防措施,基于風(fēng)險(xiǎn)分析,對相關(guān)批次產(chǎn)品做出后處理決定'從而降低藥品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn),既是保證藥品質(zhì)量的重要工作,又是質(zhì)量體系持續(xù)改進(jìn)的原動(dòng)力。本文通過對4批無菌產(chǎn)品的無菌檢査實(shí)驗(yàn)全過程的回顧性分析和調(diào)查,探索導(dǎo)致無菌實(shí)驗(yàn)OOS結(jié)果的明確原因,以期建立微生物實(shí)驗(yàn)室完善的OOS調(diào)査方案。
1、材料、儀器與試劑
全自動(dòng)智能無菌集菌儀(上海秉越zw-2008)一次性使用全封閉集菌培養(yǎng)器顯微鏡AxioScopeA
全自動(dòng)微生物鑒定儀
酵母菌鑒定卡
無菌檢查樣品為4個(gè)批號(hào)的注射用頭孢噻膀鈉。
2、方法與結(jié)果
2.1實(shí)驗(yàn)方法
2.1.1藥品的無菌檢查
依照《中國藥典》2010年版_檢驗(yàn)注射用頭孢噻肟鈉的無菌檢查項(xiàng)目。
2.1.2鏡檢及鑒定
取陽性樣本,劃線TSA平板培養(yǎng)24~48h,按照儀器及試劑的使用說明,對經(jīng)過純化的微生物進(jìn)行革蘭氏染色,確定微生物形態(tài),然后根據(jù)形態(tài)選擇鑒定卡,使用全自動(dòng)微生物鑒定儀Vitek2Compact進(jìn)行鑒定。
2.2結(jié)果
4個(gè)批號(hào)的注射用頭孢噻肟鈉的無菌檢查檢驗(yàn)結(jié)果如表1所示:2號(hào)和4號(hào)樣品改良馬丁培養(yǎng)基均在第3天變渾濁。取改良馬丁培養(yǎng)液劃線TSA平板,30~35℃培養(yǎng)48h,平板上呈現(xiàn)白色、光滑、邊緣整齊、形態(tài)單一的菌落。
革蘭氏染色鏡檢結(jié)果為酵母菌。經(jīng)全自動(dòng)微生物鑒定儀Vitek2Compact鑒定,均為季也蒙假絲酵母。
3、OOS結(jié)果的調(diào)查和分析
依據(jù)新版GMP對OOS調(diào)查的要求,回顧性分析調(diào)查注射用頭孢噻肟鈉無菌檢查OOS結(jié)果產(chǎn)生的原因。
①日常監(jiān)控和驗(yàn)收記錄:
培養(yǎng)基的驗(yàn)收記錄、培養(yǎng)基的制備和滅菌記錄、檢驗(yàn)器具準(zhǔn)備和滅菌記錄、消毒液配置和無菌過濾記錄、潔凈室清潔消毒記錄、檢驗(yàn)員使用潔凈服的滅菌記錄和使用記錄、無菌檢驗(yàn)操作記錄以及環(huán)境監(jiān)控記錄等均未發(fā)現(xiàn)異常。
②人員:
甲和乙實(shí)驗(yàn)人員均能熟練掌握無菌檢驗(yàn)的流程、監(jiān)控要點(diǎn)和無菌操作規(guī)范。
③樣品:
確認(rèn)樣品的編號(hào)和批號(hào)無誤,無菌檢査取樣前,樣品西林瓶外觀正常,西林瓶蓋并未發(fā)現(xiàn)松動(dòng)的跡象。
④實(shí)驗(yàn)器具:
實(shí)驗(yàn)中使用的py330集菌器、一次件使用無菌注射器以及一次性使用無菌手套的無菌驗(yàn)收均符合規(guī)定,且用于當(dāng)天其他檢品的檢驗(yàn),并未發(fā)現(xiàn)污染情況。
⑤培養(yǎng)基及沖洗液和稀釋液:
無菌檢查用培養(yǎng)基的陰性對照均符合規(guī)定,且同批制備和滅菌的培養(yǎng)基用于同日檢查的其他檢品,并未發(fā)現(xiàn)污染情況。
⑥檢驗(yàn)環(huán)境:
現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)控的3皿沉降菌監(jiān)測的TSA平皿均未有菌落生長,并未出現(xiàn)污染情況。定期環(huán)境檢測表面菌符合規(guī)定,樣品無菌檢查當(dāng)日潔凈空調(diào)系統(tǒng)均運(yùn)行正常。
⑦不同檢驗(yàn)體系對結(jié)果判定造成的影響:
由于現(xiàn)行《中國藥典》無菌檢查使用的改良馬丁培養(yǎng)基不同于標(biāo)準(zhǔn)使用的TSB,將改良馬丁培養(yǎng)物劃線TSA平板上長出的菌落接種至TSB培養(yǎng)液中in),24h后培養(yǎng)液即出現(xiàn)混濁現(xiàn)象。因此可以排除因檢驗(yàn)體系不同造成的實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。
⑧菌株:
樣品檢出菌經(jīng)鑒定為季也蒙假絲酵母菌,比對曰常潔凈室監(jiān)控收集的菌株建立的菌庫,潔凈室中從未監(jiān)測到此種菌株。
⑨附加實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與分析:
通過以上分析,初步認(rèn)定無菌不合格為實(shí)驗(yàn)有效結(jié)果。但鑒于此次無菌檢驗(yàn)過程并未嚴(yán)格按照新版GMP和《中國藥典》2015年版規(guī)定的對檢驗(yàn)環(huán)境和人員的全面監(jiān)控,環(huán)境和人員帶來的污染仍有造成OOS結(jié)果的可能性,附加實(shí)驗(yàn)就是對檢驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行全面監(jiān)測。
現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)控按照新版GMP的要求實(shí)施,并增加對潔凈室回風(fēng)口浮游菌的監(jiān)測,監(jiān)測結(jié)果均符合規(guī)定。微生物監(jiān)測方面,除實(shí)驗(yàn)人員無菌服胸口處采集到一個(gè)菌落,其他均未有菌落生長。實(shí)驗(yàn)人員無菌服采集到的菌落為革蘭氏陽性球菌,經(jīng)鑒定為Kocuriakristinae(克氏庫克菌),此菌種曾在日常潔凈室監(jiān)控中不止一次檢出過,并未對樣品產(chǎn)生過污染。
4、結(jié)論與討論
OOS結(jié)果表明,并未在實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致OOS結(jié)果的明確原因,檢出菌也并非由于實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)過程帶來的污染,懷疑樣品本身被季也蒙假絲酵母菌所污染,從而導(dǎo)致無菌檢查的陽性結(jié)果。
通過對上述OOS的調(diào)查和分析,初步建立了微生物實(shí)驗(yàn)室OOS結(jié)果調(diào)查的分析方案,分別從人、機(jī)、料、法、環(huán)5個(gè)方面進(jìn)行闡述:
人——實(shí)驗(yàn)人員??疾烊藛T是否經(jīng)過相關(guān)檢驗(yàn)的培訓(xùn)和考核,是否了解該項(xiàng)檢驗(yàn)的流程和監(jiān)控要點(diǎn)。無菌區(qū)全體人員每年應(yīng)進(jìn)行一次再培訓(xùn)和資格的再確認(rèn),對無菌區(qū)人員操作服和手套表面的微生物監(jiān)測嚴(yán)格按新版GMP執(zhí)行;
機(jī)——實(shí)驗(yàn)中使用的儀器設(shè)備。檢查集菌儀等儀器近期使用記錄是否發(fā)現(xiàn)異常,參數(shù)設(shè)置是否正確。儀器的計(jì)量和校準(zhǔn)均需在有效期內(nèi),無菌區(qū)內(nèi)使用的儀器需定期消毒并定期進(jìn)行微生物的表面監(jiān)測,使用的器具需經(jīng)滅菌消毒,一次性使用器具需經(jīng)質(zhì)量驗(yàn)收;
料——樣品、培養(yǎng)基、稀釋液和沖洗液。檢查剩余樣品的編號(hào)和批號(hào)是否準(zhǔn)確,樣品的外觀是否異常,瓶蓋是否有松脫現(xiàn)象以及樣品的前期存放條件和取樣方式是否合理。必要時(shí),對樣品的瓶蓋和瓶口等關(guān)鍵部位擦抹取樣,培養(yǎng)觀察;
檢查培養(yǎng)基質(zhì)量驗(yàn)收記錄和配制記錄,確認(rèn)配制和滅菌是否合理有效,是否用于其他樣品的檢驗(yàn),培養(yǎng)基、稀釋液和沖洗液的陰性對照應(yīng)符合規(guī)定;
法——檢驗(yàn)方法和依據(jù)。實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合設(shè)定實(shí)驗(yàn)和檢驗(yàn)依據(jù)的要求;
環(huán)——實(shí)驗(yàn)環(huán)境。檢查潔凈空調(diào)系統(tǒng)是否運(yùn)行正常,監(jiān)測記錄包括定期監(jiān)控記錄和實(shí)驗(yàn)現(xiàn)場環(huán)境監(jiān)控記錄,是否符合潔凈度要求,清潔記錄顯示是否按時(shí)清潔,消毒液是否使用合理。另外,未確定OOS結(jié)果產(chǎn)生的明確原因時(shí),不能急于對環(huán)境進(jìn)行消毒處理,以免忽略了可能的環(huán)境污染因素。
微生物負(fù)荷和實(shí)驗(yàn)檢出菌的比對分析。實(shí)驗(yàn)室的微生物負(fù)荷,包括潔凈室的空氣微生物、表面微生物和人員操作服及手套的表面微生物。對日常環(huán)境監(jiān)控收集的菌株進(jìn)行有效鑒別和分析,建立潔凈室生物負(fù)載數(shù)據(jù)庫,可為微生物OOS調(diào)査提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
對檢出菌進(jìn)行鑒定,分析監(jiān)控收集的微生物分布和鑒定與陽性結(jié)果的相關(guān)性,當(dāng)發(fā)現(xiàn)與陽性菌株相近的菌株時(shí),可利用分子生物學(xué)方法比對陽性菌株與微生物負(fù)荷的同源性,為陽性菌的污染溯源提供依據(jù)。
此外,對不同實(shí)驗(yàn)會(huì)產(chǎn)生不同的OOS結(jié)果,可針對某些相關(guān)環(huán)節(jié)靈活考察。例如,針對不同的微生物,采用不同的監(jiān)測手段,陽性檢出菌為酵母菌時(shí),增加沙氏葡萄糖瓊脂用于環(huán)境監(jiān)控的附加實(shí)驗(yàn),則能夠更好地確認(rèn)環(huán)境中的該類微生物。
需要著重強(qiáng)調(diào)的是,檢出菌的鑒別對于OOS結(jié)果的調(diào)查非常關(guān)鍵,決定后是否可以發(fā)現(xiàn)根本原因,應(yīng)該給予足夠重視。
綜上所述,微生物相關(guān)檢驗(yàn)項(xiàng)目OOS結(jié)果的調(diào)查工作量很大,且專業(yè)性強(qiáng),實(shí)驗(yàn)室不僅需要具備受過良好培訓(xùn)和具有豐富檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的工作人員,還需建立完善的OOS調(diào)查方案來規(guī)范調(diào)查操作。