細(xì)胞培養(yǎng)基中的添加劑及其作用

 培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM 或M199中同樣很容易生長?？傊琈EM做粘附細(xì)胞培養(yǎng) ;RPMI-1640 做懸浮細(xì)胞和人白血病細(xì)胞單層培養(yǎng)是一個好的開始，它也廣泛應(yīng)用于哺乳動物 細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，如人骨髓瘤細(xì)胞、鼠雜交瘤細(xì)胞、人白細(xì)胞以及B細(xì)胞和T細(xì)胞;各種目的無血清培養(yǎng)最好AIM V(12005)培養(yǎng)基(SFM)。選擇細(xì)胞的培養(yǎng)基也可以到ATCC上查詢，ATCC (American Type Culture Collection) 收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cell s and hybridomas鏈接，輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述，包括細(xì)胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關(guān)文獻(xiàn)等資料。

同一種培養(yǎng)基也會因其添加物的不同而應(yīng)用于不同的細(xì)胞培養(yǎng)和不同的實驗需求，下面就詳細(xì)介紹下培養(yǎng)基中各種添加劑的功能。

1. L-谷氨酰胺(L-Glutamine)在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?

是細(xì)胞生長的必須氨基酸，為培養(yǎng)的細(xì)胞提供重要的能量來源。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，降解率隨保存溫度而變。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。

2. GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?

GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽，是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解。

3. 培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

4. Hank′s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?

HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2 中，溶液會變堿，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液，。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基 中儲存的組織，用Hanks′液就可以了。

5. 培養(yǎng)液pH對細(xì)胞生長的影響?

由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對細(xì)胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對pH的要求也不*相同，原代培養(yǎng) 細(xì)胞一般對pH變動耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時，需要注意一點：培新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

6. 培養(yǎng)細(xì)胞時應(yīng)使用5%還是10%CO2，或者根本沒有影響?

答：一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7g時，細(xì)胞培養(yǎng)時應(yīng)使用10% CO2;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g 時，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。

7. Hepes的作用

HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥1基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細(xì)胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2的環(huán)境，CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持pH7.0左右。一般在進(jìn)行克隆 化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經(jīng)細(xì)胞 原代培養(yǎng)的過程中能用到

8. NaHCO3

培養(yǎng)基中使用了NaHCO3-CO2緩沖系統(tǒng)，并采用開放培養(yǎng)，使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時溢出培養(yǎng)瓶，再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%)，與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值。

9. NEAA：非必須氨基酸

NEAA(非必需氨基酸)是含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到的原培養(yǎng)基不同，NEAA也有不同的種類，比如添加至MEM的NEAA，含L-Alanine、L-Asparagine、 L-Aspartic Acid、L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。

10. 氯化鈣

氯化鈣對成骨細(xì)胞培養(yǎng)有毒性，所以成骨細(xì)胞的培養(yǎng)基中應(yīng)不含氯化鈣。

11. 什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?

酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響，可以通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長，當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分，很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。

研究表明，酚紅可以模擬固醇類激素的作用，(特別是雌激素)。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。

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