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酶標(biāo)儀的原理
閱讀：1625 發(fā)布時(shí)間：2021-9-3
酶標(biāo)儀的原理
酶標(biāo)儀即酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的專用儀器?？珊?jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個(gè)比色計(jì)，即用比色法來(lái)分析抗原或抗體的含量。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法簡(jiǎn)稱酶標(biāo)法，是標(biāo)記技術(shù)中的一種，是從熒光抗體技術(shù)，同位素免疫技術(shù)發(fā)展而來(lái)的一種敏感，特異，快速并且能自動(dòng)化的現(xiàn)代技術(shù)。
酶標(biāo)法的基本原理是將抗原或抗體與酶用膠聯(lián)劑結(jié)合為酶標(biāo)抗原或抗體，此酶標(biāo)抗原或抗體可與固相載體上或組織內(nèi)相應(yīng)抗原或抗體發(fā)生特異反應(yīng)，并牢固地結(jié)合形成仍保持活性的免疫復(fù)合物。當(dāng)加入相應(yīng)底物時(shí)，底物被酶催化而呈現(xiàn)出相應(yīng)反應(yīng)顏色。顏色深淺與相應(yīng)抗原或抗體含量成正比。
由于此技術(shù)是建立在抗原-抗體反應(yīng)和酶的高效催化作用的基礎(chǔ)上，因此，具有高度的靈敏性和特異性，是一種極富生命力的免疫學(xué)試驗(yàn)技術(shù)。
酶標(biāo)儀就是應(yīng)用酶標(biāo)法原理的儀器，酶標(biāo)儀類似于一臺(tái)變相光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。
光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過(guò)濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本.該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過(guò)標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)，電信號(hào)經(jīng)前置放大，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，Z后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。
微處理機(jī)還通過(guò)控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來(lái)移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過(guò)程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè)，因此省去了X，Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單。
微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。其常見(jiàn)規(guī)格有40孔板，55孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對(duì)其可進(jìn)行一孔一孔地檢測(cè)或一排一排地檢測(cè)。
酶標(biāo)儀測(cè)定是在特定波長(zhǎng)下，檢測(cè)被測(cè)物的吸光值。隨著檢測(cè)方式的發(fā)展，擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀叫做多功能酶標(biāo)儀，可檢測(cè)吸光度(Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)發(fā)光(Lum)。
酶標(biāo)儀從原理上可以分為光柵型酶標(biāo)儀和濾光片型酶標(biāo)儀。光柵型酶標(biāo)儀可以截取光源波長(zhǎng)范圍內(nèi)的任意波長(zhǎng)，而濾光片型酶標(biāo)儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)。
酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過(guò)相干濾光片來(lái)獲得，也可用分光光度計(jì)相同的單色器來(lái)得到。在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，其效果是相同的。光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡，光欄后到達(dá)反射鏡，經(jīng)反射鏡作90°反射后垂直通過(guò)比色溶液，然后再經(jīng)濾光片送到光電管。
酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分。自動(dòng)型的儀器有X，Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測(cè)試，手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來(lái)進(jìn)行測(cè)量。
在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)儀，此類酶標(biāo)儀一般都是自動(dòng)化型的。它設(shè)有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器，如12個(gè)通道的儀器設(shè)有12條光束或12個(gè)光，12個(gè)檢測(cè)器和12個(gè)放大器，在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下，樣品12個(gè)為一排被檢測(cè)。多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高。
酶標(biāo)儀的原理
多功能酶標(biāo)儀指擁有多種檢測(cè)模式的單體臺(tái)式酶標(biāo)儀。通常具有比色皿插槽，可檢測(cè)吸光度(Abs)、熒光強(qiáng)度(FI)、時(shí)間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學(xué)發(fā)光(Lum)?？蓪?duì)以微孔板為體系的實(shí)驗(yàn)提供多種不同模式的檢測(cè)。通常，多功能酶標(biāo)儀至少可提供“吸收光"“、熒光"“、發(fā)光"三種不同的檢測(cè)模式。一些中多功能酶標(biāo)儀還可完成“時(shí)間分辨熒光"“、熒光偏振"“、熒光共振能量轉(zhuǎn)移"等高級(jí)熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。該儀器適用于臨床檢驗(yàn)、微生物學(xué)、流行病學(xué)、免疫學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)以及農(nóng)林科學(xué)等領(lǐng)域。廣泛用于醫(yī)院、血站、防疫站、生物制品等部門(mén)。
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