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PriCells: 細(xì)胞內(nèi)糖類染色方法—過碘酸席夫反應(yīng)法
PriCells: 細(xì)胞內(nèi)糖類染色方法—過碘酸席夫反應(yīng)法
基本原理：
過碘酸是一種強(qiáng)氧化劑，過碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基變?yōu)橐叶┗?，乙二醛基繼而與Schiff試劑結(jié)合，Schiff試劑本為無色亞硫酸品紅復(fù)合物，但它與乙二醛基結(jié)合后形成紫紅色反應(yīng)物。顏色反應(yīng)的深淺取決于組織內(nèi)多糖（包括糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖脂等）的乙二醇分子的多寡。
基本原理：
1. 席夫試劑的制備
（1） 稱取0.5g堿性品紅加入100ml沸水中，不斷攪拌下煮5min，使其充分溶解；
（2） 待溶液冷卻至50℃時(shí)過濾，加入濃度為1mol/L的HCl 10ml；
（3） 當(dāng)溶液冷卻至25℃時(shí)再加入0.5g偏重亞硫酸鈉，在室溫下放置24h，其顏色呈褐色或淡黃色；
（4） 再將0.5g活性炭加入呈色液中振搖1min后過濾，濾液為無色；
（5） 將濾液置于棕色瓶內(nèi)于4℃密封保存，一般可保存數(shù)月；
2. 卡諾固定液配制
將30ml氯仿和10ml苯y(tǒng)i酸加入60ml純乙醇中即得；
3. 甲醛鈣固定液配制
甲醛10ml和1g CaCl2混合加水定容至100ml即得；
染色步驟：
1. 用Hanks液將蓋玻片漂洗3次；
2. 用卡諾（Carnoy）固定液或甲醛鈣固定液固定5—10min；
3. 加入0.5%過碘酸作用10—15min；
4. 用蒸餾水漂洗1—2min；
5. 移入席夫試劑中作用15—30min，蓋片樣品稍稍變紅；
6. 用自來水漂洗5—10min，蓋片樣品變紅；
7. 用蒸餾水反復(fù)沖洗；
8. 用50%、70%、80%、90%、95%、100%的梯度乙醇逐級脫水各2min；
9. 用二甲苯透明，用光學(xué)樹脂封片后觀察；
結(jié)果：
細(xì)胞含糖區(qū)呈紫紅色。細(xì)胞核呈粉紅色至紫紅色，胞質(zhì)無色；