人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞株培養(yǎng)問(wèn)題：

　　Q1. 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏??！因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的pH值會(huì)發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì)受到影響對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

　　Q2.人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求，細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以，各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí)，應(yīng)重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項(xiàng)目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中，其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色，-24C保存。

　　人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

　　HUVEC為原代細(xì)胞，除復(fù)蘇、凍存過(guò)程中與常規(guī)細(xì)胞系如293T等貼壁細(xì)胞雷同外，需主要注意的是培養(yǎng)液放置溫度、Trypsin消化細(xì)胞過(guò)程。

　　1）培養(yǎng)液放置溫度：細(xì)胞代理銷(xiāo)售公司技術(shù)推薦在使用前30min室溫（25-27℃）中放置配制好的培養(yǎng)液，用臉貼培養(yǎng)瓶而感覺(jué)到不冷（即接近人體溫）即可使用。Trypsin/EDTA solution、TrypsinNeutralizer solution可同樣處置。

　　2）Trypsin消化細(xì)胞過(guò)程：加入4mL Trypsin/EDTA solution/ 25cm2 flask后晃

　　動(dòng)3次，吸棄3mL Trypsin/EDTA，室溫中作用1-3mins，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓、脫離培養(yǎng)皿即可加入3mL Trypsin Neutralizer solution進(jìn)行終止作用。

　　3）轉(zhuǎn)移細(xì)胞至15mL離心管中，1000rpm 離心5mins，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿/瓶。

　　4）復(fù)蘇、凍存雷同其他細(xì)胞操作，細(xì)胞復(fù)蘇、傳代后不可多次傳代，一次復(fù)蘇的細(xì)胞盡量滿足連續(xù)性試驗(yàn)需要。