人膀胱癌細(xì)胞的培養(yǎng)通常遵循以下步驟和條件：
一、培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基：常用RPMI-1640或DMEM等培養(yǎng)基，并添加10%的胎牛血清(FBS)和1%的雙抗(青霉素/鏈霉素)以提供必要的營養(yǎng)和防止污染。
培養(yǎng)環(huán)境：細(xì)胞需在37℃、5% CO2及飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
二、培養(yǎng)步驟
復(fù)蘇：
將凍存的細(xì)胞從液氮中取出，迅速置于37℃水浴中搖晃解凍。
解凍后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有適量培養(yǎng)基的離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，接種至培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。
第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
傳代：
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時，即可進行傳代。
棄去舊培養(yǎng)基，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1~2次。
加入適量的胰蛋白酶消化液(如0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1~2分鐘。
在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，待細(xì)胞大部分變圓并脫落后，加入培養(yǎng)基終止消化。
輕輕吹打細(xì)胞，使其脫落，并轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按1:2到1:5的比例分到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，補足培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
凍存：
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行凍存。
棄去舊培養(yǎng)基，用PBS潤洗細(xì)胞后，加入胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞。
消化完成后，加入培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打細(xì)胞使其脫落。
將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管中，以1000rpm離心5分鐘，棄去上清液。
用凍存液(如90%FBS+10%DMSO)重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度至適宜范圍。
將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，每管1ml左右，并標(biāo)注好細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期等信息。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80℃冰箱過夜，然后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
三、注意事項
無菌操作：整個培養(yǎng)過程中需嚴(yán)格遵循無菌操作原則，防止細(xì)胞污染。
消化時間：消化時間需根據(jù)細(xì)胞類型和胰蛋白酶活性進行調(diào)整，避免消化過度導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
換液周期：一般每2~3天換一次液，以保持培養(yǎng)基的新鮮和營養(yǎng)充足。
細(xì)胞狀態(tài)觀察：定期觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，包括細(xì)胞形態(tài)、密度、生長速度等，以便及時調(diào)整培養(yǎng)條件。
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