病毒大家再熟悉不過(guò),人類(lèi)的歷史可以說(shuō)是與病毒的斗爭(zhēng)史。不過(guò)隨著科學(xué)的進(jìn)步發(fā)展,研究者們發(fā)現(xiàn)了病毒存在的巨大醫(yī)學(xué)價(jià)值。目前病毒被看作基因治療或細(xì)胞治療的有效手段,對(duì)人類(lèi)攻克癌癥等疾病有重要意義。
要利用病毒,就需要認(rèn)識(shí)病毒、研究病毒,那么就需要相關(guān)的檢測(cè)方法和檢測(cè)設(shè)備對(duì)病毒進(jìn)行檢測(cè)。目前常用的方法有ELISA、RT-qPCR、TCID50等,這些都能夠用于病毒的檢測(cè),主要檢測(cè)的是病毒的滴度,既病毒活力(或毒力),由此確定病毒的感染能力。但這些方法無(wú)法看到病毒顆粒的粒徑和濃度等物理信息,而病毒的粒徑濃度又對(duì)其實(shí)際的研究應(yīng)用有重要影響,比如越小的顆粒越容易團(tuán)聚,濃度的高低影響感染效率等。所以病毒的物理表征是非常重要的,下面我們將向大家展示納米庫(kù)爾特粒度儀測(cè)試的病毒數(shù)據(jù)。
一、粒徑、濃度表征
下圖(圖1、圖2)為測(cè)試的一個(gè)病毒樣品粒徑濃度信息及2倍濃度線性測(cè)試數(shù)據(jù)??梢钥闯鲈摬《緲悠分饕椒植荚?0-120nm,存在部分大顆粒。通過(guò)測(cè)試圖我們可以清晰的看見(jiàn)該病毒樣品的粒徑和濃度分布情況,線性良好,說(shuō)明該儀器測(cè)量精度高、分辨率高、測(cè)量范圍寬,相信能夠?qū)Σ《镜难芯刻峁┎恍〉膸椭?/span>
圖1:測(cè)試病毒樣品
圖2:病毒樣品濃度線性
二、與常用方法測(cè)試對(duì)比
病毒的檢測(cè)方法有很多,各有特點(diǎn),研究者們通常會(huì)根據(jù)各自的需求進(jìn)行選擇,那這些方法之間又有什么區(qū)別呢?下面我們一起來(lái)對(duì)比一下這些檢測(cè)方法的差異吧。
表1:不同病毒表征方法對(duì)比
檢測(cè)方法 | FACS | ELISA | RT-qPCR | TCID50 | PFU | RPS |
檢測(cè)指標(biāo) | 轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表達(dá)水平 | 表面特定蛋白 | 基因拷貝數(shù) | 50%細(xì)胞被感染需要的病毒量 | 病毒感染單層細(xì)胞形成的空斑 | 粒徑濃度分布 |
熒光標(biāo)記 | 需要 | 無(wú)需 | 需要 | 無(wú)需 | 無(wú)需 | 無(wú)需 |
培養(yǎng)細(xì)胞 | 需要 | 無(wú)需 | 無(wú)需 | 需要 | 需要 | 無(wú)需 |
準(zhǔn)確度 | 偏低,多個(gè)病毒感染一個(gè)細(xì)胞 | 偏高,游離蛋白影響 | 偏高,游離基因影響 | 真實(shí)感染滴度 | 真實(shí)感染情況 | 偏高,同粒徑顆粒影響 |
重復(fù)性 | 差 | 中 | 中 | 差 | 差 | 優(yōu) |
耗時(shí) | 4d | 2-5h | 1-2h | 10d | 14d | 3-5min |
使用成本 | 高 | 中 | 高 | 中 | 中 | 低 |
圖3:不同表征方法表征病毒顆粒數(shù)據(jù)對(duì)比
可以看出,對(duì)病毒的表征方法不同,最后得到的數(shù)據(jù)結(jié)果是有差異的。FACS、TCID50、PFU等方法主要通過(guò)檢測(cè)病毒的毒力來(lái)確定其濃度,該方法檢測(cè)到的病毒都是具有感染能力的活體;ELISA、RT-qPCR、RPS等主要通過(guò)檢測(cè)病毒的特征蛋白、基因組或直接對(duì)所有的病毒顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)來(lái)表征,不論是否具有生物活性,符合條件的都會(huì)被統(tǒng)計(jì)。從上圖的數(shù)據(jù)可以看出兩類(lèi)方法的差異,活力檢測(cè)得到的濃度都較低,因?yàn)樵擃?lèi)方法只對(duì)具有感染能力的病毒進(jìn)行統(tǒng)計(jì),顆粒檢測(cè)則統(tǒng)計(jì)所有顆粒的大小及濃度信息,兩者雖不相同,但可以互相補(bǔ)充。比如病毒的粒徑均一性,更均一的病毒顆粒往往能更好的發(fā)揮效用,具有感染力的病毒顆粒的濃度占比也對(duì)病毒的感染效率有很大的影響。所以將兩種方法結(jié)合使用,互相對(duì)比驗(yàn)證能夠得到更好、感染效率更高的病毒樣品,對(duì)推動(dòng)病毒相關(guān)的研發(fā)工作具有重要意義。
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