最新發(fā)布的 MISEV2023，第一次以position paper （立場意見書）的形式發(fā)表在JEV期刊中，旨在為研究人員提供可用方法的最新建議及其在生產(chǎn)、分離和表征各種來源EV 方面的優(yōu)點和局限性。除了介紹EV研究基本原理的新技術(shù)之外，還涵蓋了目前該領(lǐng)域前沿先進的技術(shù)和方法。且讓我們一睹為快：
關(guān)于EV的表征
估計 EV的 數(shù)量、確定 EV 的存在以及評估EV 制備中非 EV 組分的份額和影響等都需要對EV進行表征。EV的表征面臨著小粒徑、尺寸異質(zhì)性和分子異質(zhì)性、缺乏通用 EV 識別方法以及許多測量技術(shù)的非 EV 特異性的挑戰(zhàn)。沒有任何一種測量或方法能夠滿足所有 EV 表征的要求，因此建議使用正交方法（即沒有相同測量限制的方法）彼此驗證，也就是說EV的表征參數(shù)作為關(guān)鍵質(zhì)量屬性 (CQA) 推薦采用兩種或兩種以上不同原理的方法檢測同一指標(biāo)。
檢測同一表征參數(shù)的正交方法（不止一種原理的方法）不太可能具有相同的偏差；例如，同時通過光學(xué)方法與非光學(xué)方法分別推導(dǎo)和檢測EV的直徑。使用正交方法對 EV 樣本進行表征，對于證明共分離物與生物標(biāo)志物或功能發(fā)現(xiàn)無關(guān)也至關(guān)重要。由于許多EV表征方法不是特定適用于EV的，或者無法檢測所有的EV，因此需要將方法和結(jié)果透明公布以確保EV數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。
除非某種方法對EVs具有高度針對性，否則檢測的輸出結(jié)果應(yīng)表述為“顆粒"或“EP"。
EV 大?。ㄒ约{米半徑或直徑為單位）的測量依賴于球形度或遷移率等假設(shè)，并且輸出結(jié)果可能受到上游變量的影響。常見的高通量方法，包括流式細(xì)胞術(shù)、NTA、RPS、多角度光散射和動態(tài)光散射 (DLS) 都假設(shè) EV 是球形的。雖然“大小"和“直徑"經(jīng)常在測量方法之間互通使用，但它們的推導(dǎo)方式也可能導(dǎo)致測量技術(shù)間的一致差異。例如，依賴于顆粒布朗運動的技術(shù)（如 NTA 或 DLS）測量的是流體動力學(xué)直徑，與冷凍電鏡等成像方法相比，會導(dǎo)致顆粒大小估計過高。而很少有方法能夠在整個EV可能的直徑范圍內(nèi)（從幾十納米到微米）精確測量 EV 尺寸。例如，雖然冷凍電鏡的高分辨率成像是最準(zhǔn)確的方法之一，但它的檢測通量相對較低，而且許多較大的 EV 往往數(shù)量較少而可能無法量化。定量低于 100 nm 的低對比度 EV 的能力也可能是一個限制因素。
隨著越來越多的研究人員使用靈敏度更高的專用單顆粒分析技術(shù)，越來越清楚的是，許多 EV 制劑表現(xiàn)出不對稱的右偏分布，例如對數(shù)正態(tài)分布，其中大多數(shù) EV 直徑 <100 nm。大多數(shù)單顆粒分析技術(shù)無法解析全部的 EV 群體，因此研究者應(yīng)共享檢測到的 EV 直徑分布，而不僅僅是平均大小、集中大小或中位值大小等匯總指標(biāo)，這些指標(biāo)很容易由于 LOD 和不對稱大小分布而傾斜。請注意，擬合大小統(tǒng)計數(shù)據(jù)，例如通過 NTA 對低折射率顆粒進行測量，可能更接近儀器的 LOD而不是 EV 群體的真實模態(tài)直徑。使用具有專有算法的軟件來確定粒徑的技術(shù)也可能導(dǎo)致軟件版本或軟件平臺之間的差異，因此也應(yīng)該提供軟件及其版本。從折射率假設(shè)推導(dǎo)出大小的技術(shù)可能會由于不同的樣本成分和裝載物而導(dǎo)致變化。從熒光探針（例如膜嵌入染料）推導(dǎo)的大小則可能會由于基于不同膜脂成分的不同染料嵌入而導(dǎo)致變化。對于無法區(qū)分 EV 和共分離物/污染物的技術(shù)，無論上游分離步驟如何，建議將直徑報告表述為“顆粒"或“EP"直徑，而不是“EV 直徑"。
公布儀器設(shè)置、軟件平臺和版本以及檢測試劑（尤其是嵌入染料）可能產(chǎn)生的影響。
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