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凱氏定氮儀經(jīng)過十幾年的不斷研發(fā)，自動蒸餾功能的ATN-300型號已經(jīng)更新?lián)Q代，變得更智能更好用，但是最近陸續(xù)碰到幾個

還用著10年前初代定氮儀的客戶找我要說明書，經(jīng)過一番尋找也算是找到了，如果有買過初代上海洪紀品牌的ATN-300定氮儀的客戶可以咨詢這篇文章。

一、 概述

蛋白質(zhì)的測定方法，目前仍以1883年凱達爾氏(Kiedahl)發(fā)明的定氮法為基礎(chǔ)，它根據(jù)各種蛋白質(zhì)都具有固定比數(shù)的氮這一事實，通過對氮的測定而推算出蛋白質(zhì)含量，此法所得的含氮量除了確定屬于蛋白質(zhì)組成成分的氮以外，還包括非蛋白質(zhì)組成的其他有機及無機態(tài)氮，所以換算所得的蛋白質(zhì)含量稱作為粗蛋白含量，一般蛋白質(zhì)中的含量為18%，換算后即每6.25克蛋白質(zhì)中含有1克氮，因此6.25成為換算系數(shù)K，但是不同的農(nóng)產(chǎn)品及其制品的實際含氮量有區(qū)別，所以不同農(nóng)產(chǎn)品必須采用不同的換算系數(shù)，如花生、大豆、蠶豆、大麥、小麥、燕麥、黑麥等含氮為17.6%，求得K=5.7，蕎麥、葵花籽、亞麻籽、棉花籽、蓖麻籽等換算系數(shù)則為K=5.50，玉米、菜籽為6.00，水稻為5.95，上述以外的其他農(nóng)產(chǎn)品的換算系數(shù)均適用6.25。盡管如此，目前世界上還沒有直接分離測定含蛋白質(zhì)的可行方法。因此，迄今為止在國內(nèi)外凱氏定氮法仍然是測定蛋白質(zhì)含量的經(jīng)典方法。所得結(jié)果準確、穩(wěn)定。

我公司研制生產(chǎn)的ATN-300型全自動定氮儀（蛋白質(zhì)測定儀），是引進消化吸收國內(nèi)外檢測新技術(shù)，結(jié)合我國國情，應(yīng)用凱氏定氮法原理，采用化學與物理學相結(jié)合完成的成套蛋白質(zhì)含量快速測定裝置。為糧食、食品、飼料、農(nóng)業(yè)、商檢等檢測部門提供了理想的檢測設(shè)備。

二、 工作原理

ATN-300型全自動定氮儀檢測原理為：

整套裝置，由電加熱消化器、全自動蒸餾器兩部分組成。要提高蛋白質(zhì)含量測定的檢測速度，其關(guān)鍵是要加速樣品消化煮解的時間，ATN-300型全自動定氮儀消化裝置采用井式電加熱爐，增大了消化管受熱面，使消化管連同管內(nèi)所注入的10ml H₂SO₄及試樣置入消化管插入井式爐內(nèi)加熱取得更佳的熱效應(yīng)，在消化前置入硒片作為催化劑進一步加速消化煮解，大大縮短消化時間。消化管內(nèi)溢出的SO₂等有害氣體，通過消化管上的排污管經(jīng)抽吸泵由水帶入下水道，有效的抑制有害氣體的外逸，由省略了實驗室中安裝毒氣通風櫥，試樣經(jīng)40分鐘左右消化煮解，即可消化。

消化的過程主要反應(yīng)如下：

R·C·H·NH2·COOH + H₂SO₄ → CO₂ + SO₂ + NH₃ + H₂O

2NH₃ + H₂SO₄ → (NH₄)₂SO₄

蒸餾與吸收過程的主要反應(yīng)如下：

(NH₄)₂SO₄ + 2NaOH → Na₂SO₄ + 2NH₃ + 2H₂O

NH₃ + 4H₃BO₃ → NH₄HB₃O₇ + 5H₂O

然后經(jīng)滴定，計算蛋白質(zhì)含量，滴定的過程是鹽酸和硼酸氫銨反映的過程。

NH₄HB₃O₇ + HCl + 5H₂O → NH₄Cl + 4 H₃BO₃

三、 技術(shù)參數(shù)

1． 測定品種：糧食、食品、飼料、釀造、土壤、制糖、乳制品、藥物等物質(zhì)

2． 測定樣品量：固體＜5g/個，液體＜15ml/個

3． 測定范圍：含氮量0.1~200mg  (0.02%~95%)

4． 測定數(shù)量：消化：一次同時消化個數(shù)按爐孔數(shù)定；單個蒸餾

5． 測定時間：消化每批45min；蒸餾每個6min

6． 測定重現(xiàn)性：平行試驗結(jié)果符合GB/T 6423-94

7． 電源：220V，50Hz

四、 使用說明

1． 其他儀器和用具

1．1分析天平：感量0.0001g

1．2實驗室用粉碎機或研缽

1．3酸式滴定管：25ml或10ml

1．4錐形瓶：容積250ml

1．5分樣篩：孔徑0.45mm(40目)

2．試劑

2．1鹽酸(HCl)：分析純(GB622) 0.05mol/L標準液，(4.2ml鹽酸，注入1000ml蒸餾水)碳酸鈉法標定鹽酸。

2．2氫氧化鈉(NaOH)：化學純或工業(yè)純(GB629)、40g溶于蒸餾水中溶成100ml，配成40%水溶液(m/v)。

2．3硼酸(H₃BO₃)：分析純(GB628)2g，溶于蒸餾水中配成100ml2%水溶液(m/v).

2．4混合指示劑：甲基紅(G₅H₁₅N₃O₂)(HG3-958)溶于乙醇配成0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠(HG3-1220)溶于乙醇配成0.5%乙醇溶液，二種溶液等體積混合，陰涼處保存(保存期三個月以內(nèi))。

2．5硫酸銅(CuSO₄·5H₂O)分析純(GB655)10g；硫酸鉀(K₂SO₄) (HG3-920)分析純150g，在研缽中研磨，仔細混勻后過40目篩(加速劑)。

2．6濃硫酸(H₂SO₄)化學純(GB625)(含量98%、無氮)。

3．操作方法

3．1樣品消化

稱取經(jīng)粉碎通過40-60目/寸試樣0.5-1g(視含量而定)無損的置入已洗滌烘干的試管中加催化劑5g左右和10ml左右硫酸。

將消化管分別放入消化架各個孔內(nèi)，然后置于消化爐上，開啟抽氣三通上連接的自來水龍頭，使抽氣三通處于吸氣狀態(tài)。接通電源，在加熱初始階段需注意觀測，防止試樣因急沸而飛濺。(初化時，選用電壓型控溫消化爐起初控制在150V左右，15分鐘左右后可滿電壓工作；選用數(shù)顯型消化爐起初控制在200度左右，20分鐘左右后再設(shè)定所需溫度。)

消化結(jié)束后（消化液呈澄清透明狀），將消化管架移至冷卻架冷卻至40-50度左右。然后進行下一步的蒸餾。

3．2蒸餾

1、 用配套橡膠管根據(jù)結(jié)構(gòu)圖和儀器側(cè)面標簽提示連好管路。

2、 （各參數(shù)數(shù)值設(shè)定）必須按住啟動鍵打開側(cè)面電源開關(guān)，按啟動鍵，測定酸泵、水泵、堿泵的流量參數(shù)，按下一項鍵，在右邊托盤上接收瓶，接著按加酸按鍵，液晶屏上顯示4秒左右時，再按此鍵就關(guān)閉了酸泵，此時取下接收瓶倒掉液體（主要是防止管路中空氣導(dǎo)致加液不準），接著重復(fù)上面加液工作，停止后，取下接收瓶用量筒量出數(shù)值，計算出每秒加酸的量，在自動加液時只要輸入時間就可知道加了多少液體量（根據(jù)實驗需要量設(shè)定），加堿、加蒸餾水在左邊放上消化管，加量及計算的方法同上。液晶屏提示：設(shè)定加酸時間（毫秒為單位），根據(jù)實驗需要量而設(shè)定好，加堿、加蒸餾水方法同上（秒為單位）。（一般加堿量是消化時濃硫酸用量的5倍以上，蒸餾水是15ml，硼酸50ml），按下一項鍵同時按住啟動鍵恢復(fù)正常畫面（各泵流量已知），此過程只要操作一次就可以，以后都不用再操作此過程。

3、 正常工作之一（設(shè)定過程）畫面

液晶屏提示，有1、2、3、4，四個存儲編號（代表可存儲4個操作程序）

選好存儲樣品編號，液晶屏提示檢查、設(shè)定

用下一項鍵（上一項鍵）可選擇所需程序

如選設(shè)定可設(shè)定各個參數(shù)（注意：每次開機只能設(shè)定一個存儲程序編號參數(shù)）

A、根據(jù)提示設(shè)定開啟電磁閥的時間值，請用上升或下降和下一項鍵和（上一項鍵）調(diào)（出廠時設(shè)定48秒以上，請不要小于40秒以免燒保險絲），接著根據(jù)提示設(shè)定蒸汽穩(wěn)定的時間數(shù)值，方法同上（出廠時設(shè)定60秒以上，請不要小于50秒以免燒保險絲）；根據(jù)提示設(shè)定各個泵參數(shù)（泵流量前面已經(jīng)測算過），根據(jù)提示設(shè)定報警定時器時間方法同上，（出廠時設(shè)定420秒）。

B、如選檢查可以檢查設(shè)定參數(shù)，再按下一項鍵，進入正常畫面，按啟動鍵，開始工作，直到顯示請選擇工作模式畫面時。

液晶屏顯示自動還是手動

在選用自動工作模式時（手動模式同樣），按一下啟動按鍵，再打開自來水龍頭，

這時夾緊側(cè)面排水夾子，下方有機玻璃窗口里玻璃瓶內(nèi)有水進入即可，過一段時間后，下方有機玻璃瓶窗口里玻璃瓶有水進入，液晶屏提示電磁閥關(guān)閉，同時時間減少顯示為0，顯示電磁閥開，液晶屏顯示蒸汽穩(wěn)定的時間數(shù)，同時時間減少顯示到0，并發(fā)出蜂鳴聲，顯示蒸汽穩(wěn)定。這時關(guān)閉右側(cè)蒸汽開關(guān)，提起左側(cè)紅色手柄把消化管固定在左邊的托架上，在右邊托盤放上250ml的接收瓶，（手動模式時，根據(jù)順序按各個按鍵加入各種液體后）再按啟動按鍵，按順序自動加入各種液體（按照程序設(shè)定值），完成好后，打開右側(cè)蒸汽開關(guān)，再按啟動按鍵，液晶屏顯示報警定時器時間，數(shù)值減為0時發(fā)出蜂鳴聲?？捎^察接收液數(shù)量是否達到（一般接收瓶內(nèi)液體要達到150ml以上），接著移下接收瓶，這時關(guān)閉右側(cè)蒸汽開關(guān)，取下樣品待滴定用。第二個樣品同上方法。

4、 關(guān)機

關(guān)閉電源，關(guān)水龍頭，打開側(cè)面排水夾子，關(guān)閉右側(cè)蒸汽開關(guān)，把連堿泵的膠管放入蒸餾水容器內(nèi)，前面放入消化管，等排完水。關(guān)一次開關(guān)，再按住啟動鍵打開側(cè)面電源開關(guān)用手動模式按加堿鍵抽蒸餾水清洗堿泵，酸泵同樣清洗，關(guān)電結(jié)束。

3．3滴定

用標定后的鹽酸溶液進行滴定接收瓶內(nèi)的溶液，滴定溶液由綠色變?yōu)榈仙珵榻K點，記下消耗鹽酸溶液的毫升數(shù)，按下式計算蛋白含量：

式中：V₂—滴定試樣時消耗酸標準溶液的體積 (ml)

      V₁—滴定空白時消耗酸標準溶液的體積 (ml)

      C—標準酸溶液的摩爾濃度

      0.014—氮的毫克當量數(shù)

      K—氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)

      W—試樣重量 (g)

(空白測定：用0.1克糖代替樣品或不加樣品做空白測定)

平行測定的結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留小數(shù)后二位。

3．4 換算系數(shù)

結(jié)果報告中必須注明氮換算成粗蛋白質(zhì)的系數(shù)，換算系數(shù)見下表。

3．5注意事項

1．消化時若有氣體外溢，加大抽氣三通連接的自來頭的壓力。消化密封圈每次試驗結(jié)束后清洗一遍延長使用壽命。

2．每天工作完，把NaOH溶液外接的皮管移入蒸餾水瓶內(nèi)，前面套好消化管抽洗幾次，防止堿液殘留在堿泵內(nèi)而影響使用壽命，也可防止單向閥粘連，待下次使用時，在蒸餾樣品前需先排出100mlNaOH，以防稀釋NaOH，造成第一個樣品加入的堿液濃度不夠。

3．每次試樣蒸餾結(jié)束，必須迅速取下消化管，防止消化管液體倒吸至蒸發(fā)爐內(nèi)腐蝕電熱管。

4．用戶在遵守本儀器的運輸、貯存、安裝、調(diào)整和使用規(guī)程的條件下，如發(fā)現(xiàn)儀器因制造質(zhì)量問題而不能正常工作時，從收獲之日起一年內(nèi)實行三包；或開箱時發(fā)現(xiàn)包裝不良而發(fā)生損壞，附件與裝箱單不符，短缺零件等情況，請與我公司質(zhì)檢部門聯(lián)系。來函注明產(chǎn)品型號、編號和出廠日期。本儀器使用時，要求用戶嚴格按照說明誰規(guī)定進行，如有疑問或?qū)Y(jié)構(gòu)改進的意見，請來函告知我公司質(zhì)檢部門。