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多能干細(xì)胞 (hPSC) 三系分化定量聚合酶鏈反應(yīng) (qPCR) 陣列設(shè)計(jì)用于表征 hPSC 及其三系分化能力。hPSC,包括胚胎干細(xì)胞 (ES) 和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 (iPS),具有自我更新的能力,能夠分化為三個(gè)胚胎胚層的細(xì)胞:外胚層、中胚層和內(nèi)胚層。該 qPCR 陣列提供體外定向或自發(fā)分化后未分化的 ES 和 iPS 細(xì)胞及其三系衍生物的基因表達(dá)譜,從而驗(yàn)證細(xì)胞系分化為三個(gè)胚層的能力。根據(jù)基因在 ES 和 iPS 細(xì)胞中與 hPSC 衍生的外胚層、中胚層和內(nèi)胚層譜系細(xì)胞相比的差異表達(dá)來選擇基因(Adewumi 等人;Bock 等人)。
qPCR 用于確定多個(gè)樣品中基因表達(dá)的穩(wěn)態(tài) mRNA 水平的變化,通常歸一化為內(nèi)部對照基因的相對表達(dá)?;蛱禺愋砸锟蓴U(kuò)增從 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄的 cDNA 庫中的靶序列,并且與 TaqMan® 技術(shù)一樣,雜交序列特異性探針提供來自 Taq DNA 聚合酶的 5' 核酸外切酶活性的熒光信號。熒光信號的積累速率用于定量樣品 cDNA,從而定量原始細(xì)胞裂解物中 mRNA 的量。
該 qPCR 芯片包含經(jīng)驗(yàn)證的引物和探針,用于檢測 90 個(gè)基因,這些基因的表達(dá)與處于分化早期階段的未分化 hPSC 或其衍生物相關(guān),以及 6 個(gè)內(nèi)源性(管家)對照基因。TBP(TATA 盒結(jié)合蛋白)qPCR 對照模板作為合成 DNA 陽性對照提供。
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