細胞庫的建立可為生物制品的生產提供檢定合格、質量相同、能持續(xù)穩(wěn)定的細胞。細胞庫是生物制藥的源頭，是重中之重，對于生產或檢定用細胞庫，各國監(jiān)管機構一般要求三級管理，即原始細胞庫（PCB）、主細胞庫（MCB）和工作細胞庫（WCB）。PCB負責提供種子細胞，經過不斷的克隆、篩選和鑒定后，形成MCB，再通過傳代擴增等過程，最終形成WCB，用于大規(guī)模的生物制品生產。如果穩(wěn)定表達細胞株或者商業(yè)化的細胞株為引進和購買的，也可以采用MCB和WCB組成的二級細胞庫管理。當然，在某些特殊的情況下，也可以只選擇建立MCB一級細胞庫，但需經過監(jiān)管機構批準，足見其對細胞質量和藥品安全的嚴格要求。PCB的數量是根據實際來計算的，每個品種可能都不一樣，需要考慮后續(xù)生產、檢定需要、保藏年限，檢測用數量、復檢頻率等，MCB和WCB凍存多少數量，根據需要確定，需保證后續(xù)生產、檢定足夠，即遵循“夠用原則"。

細胞庫建庫流程

干細胞療法已被證明是一種很有前途的創(chuàng)新療法，其中，間充質干細胞（MSC）憑借低免疫原性、高增殖潛力以及免疫調節(jié)等特性被廣泛應用研究。根據文獻統(tǒng)計，截至2023年，全球已有一千多項注冊臨床試驗使用MSC療法，12種MSC療法獲得監(jiān)管機構批準商業(yè)化。未來，間充質干細胞將在更多疾病的治療中發(fā)揮重要作用。然而，MSC細胞的凍存卻非易事，成功建立可靠的MSC細胞庫往往需要處理好各種操作細節(jié)，此外，MSC在超低溫環(huán)境下，代謝活性和黏附能力出現降低，細胞膜和細胞骨架發(fā)生變化。更為常見的是，MSC 經過超低溫凍存，基本上都存在細胞活率下降問題，這對臨床治療效果有一定影響。

MSC作為種子細胞或者工作細胞，細胞凍存是繞不開的步驟。如ICH Q5D所述，防止外源因子污染，保證細胞在各個凍存管中均勻分布，保證復蘇細胞具有恒定而符合生產要求的活力，是細胞庫制備的三個基本要求。而目前國內大部分生物制藥企業(yè)還是采用手動的方式來進行細胞灌裝，其存在細胞樣品與凍存液接觸時間長導致細胞狀態(tài)變差使得細胞庫質量差、大量的人工重復操作帶來的誤差以及染菌風險等問題，為了節(jié)省建庫的時間、提高細胞的一致性、降低污染風險、節(jié)省質量控制的成本，需要一種可靠有效的細胞灌裝方法，本篇將為大家重點介紹高通量自動化灌裝MSC細胞的解決方案—艾貝泰AbioFill V100細胞灌裝系統(tǒng)。

MSC細胞灌裝實驗內容

1.實驗材料：

細胞：貼壁的間充質干細胞（MSC）凍存液：90%FBS+10%DMSO凍存管：Corning 430659（2ml,Ex）AO/PI染色液程序凍存盒等

2.儀器設備：

灌裝系統(tǒng)：AbioFill V100細胞灌裝系統(tǒng)細胞質量監(jiān)控：Countleader細胞計數儀FL1000

3.實驗參數：

灌注模式：開蓋-灌注-封蓋灌注流速：350μL/s灌注體積：1000μL  

4.細胞灌裝視頻

5.討論：MSC細胞上機前用30mL凍存液重懸（50mL離心管體系），灌裝前細胞留樣進行細胞計數，測得細胞活率為97.55%，細胞密度約1.15E6cells/mL。使用灌裝系統(tǒng)進行24支凍存管灌注，灌裝體積為1mL/管，灌裝后取樣對24支凍存管的細胞進行細胞計數，并使用程序降溫盒在-80℃凍存此24支細胞。凍存24h后，37℃水浴復蘇，進行細胞計數。

灌注前/后、復蘇后平均活率（左）與平均活細胞密度（右）柱狀圖（n=24）

灌注前/后、復蘇后平均活率與活細胞密度表（n=24）

經統(tǒng)計分析，發(fā)現灌注前、后細胞活率與細胞濃度差異不大，復蘇后的細胞活率稍微有所下降，下降幅度約為3%，為可接受范圍?；盥氏陆悼赡芤驗楣嘌b后取樣計數過程使細胞在常溫凍存液內時間過長導致，縮短操作時間可以有效避免此活率下降。

以上實驗證實，AbioFill V100全自動細胞灌裝系統(tǒng)能自動化、高效地灌裝MSC細胞，灌裝前后細胞質量不受到影響，可以建立高質量、均一性的MSC細胞庫，解決MSC細胞大規(guī)模凍存的工業(yè)化問題，促進細胞治療行業(yè)的良好發(fā)展。

AbioFill V100灌裝系統(tǒng)

FL1000細胞計數儀