全內(nèi)反射熒光成像系統(tǒng)（TIRFM）

美國(guó)TIRF公司全內(nèi)反射熒光顯微鏡交鑰匙工作站

——類型齊全：物鏡式、棱鏡型和光導(dǎo)型全內(nèi)反射顯微鏡，搭配靈活、經(jīng)濟(jì)

細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)裝配

該TIRF全內(nèi)反射熒光顯微鏡工作站可靈活由基于棱鏡式、光導(dǎo)式和物鏡式的全內(nèi)反射熒光顯微鏡，無(wú)限物鏡20倍、40倍、60倍或100倍、微光CMOS相機(jī)和多色光纖耦合照明器技術(shù)優(yōu)勢(shì)整合而成。
●多種配置方案：棱鏡、光導(dǎo)和物鏡式任選和靈活組合
●有完整工作站式和已有顯微鏡升級(jí)配件式
●有包括開(kāi)放式灌注室和封閉式流動(dòng)室、可選的電化學(xué)和介電泳控制裝置等等
●支持TIRF流動(dòng)系統(tǒng)灌流
●支持按需定制

基于棱鏡、光導(dǎo)和物鏡的光學(xué)方案是用于TIRF顯微分析儀的三種主流幾何構(gòu)型。每種幾構(gòu)型的優(yōu)勢(shì)和其局限性，如下：

1）基于棱鏡的方案提供了佳的信噪比，然而，在倒置顯微鏡上使用開(kāi)放式灌注室的方案中很難實(shí)施。

2）基于光導(dǎo)的幾何結(jié)構(gòu)具有出色的使用靈活性和出色的信噪比，可與倒置顯微鏡上的開(kāi)放式灌注室一起使用，并且與干式、水浸式和油浸式物鏡兼容。然而，它需要更大的光功率來(lái)獲得同等強(qiáng)度的消逝波。

3）基于目鏡的方案收集的發(fā)射熒光比例大，但TIRF效應(yīng)的質(zhì)量卻大打折扣，因?yàn)榧ぐl(fā)光與發(fā)射光共享同一光學(xué)通道，導(dǎo)致大量 (~15%) 的雜散光也激發(fā)大部分樣品，因而劣化了由目鏡TIRF 產(chǎn)生的 TIRF 效應(yīng)。

該TIRF全內(nèi)反射熒光顯微鏡交鑰匙工作站充分靈活整合棱鏡型、光導(dǎo)型和物鏡型的三種類型TIRF的優(yōu)勢(shì)，有多種靈活的配置可供選擇，包括開(kāi)放式灌注室和封閉式流過(guò)室、選配的電化學(xué)和介電泳控制。充分體現(xiàn)了全內(nèi)反射熒光顯微鏡的高靈敏高分辨優(yōu)勢(shì)。

也支持為您單獨(dú)提供棱鏡、光導(dǎo)和物鏡 TIRF單元熒光顯微鏡的附加配件，升級(jí)您已有的顯微鏡為全內(nèi)反射顯微分析系統(tǒng)。

靈活組合方案可現(xiàn)實(shí)佳的信噪比、在倒置顯微鏡上使用開(kāi)放式灌注室、出色的使用靈活性和出色的信噪比，可與干式、水浸式和油浸式物鏡兼容.收集的發(fā)射熒光比例較大，TIRF效應(yīng)的質(zhì)量不打折扣，可根據(jù)根據(jù)實(shí)際需要來(lái)選擇配置。

該全內(nèi)反射熒光成像系統(tǒng)-TIRFM

全內(nèi)反射熒光顯微鏡(TIRF)利用特定的光學(xué)器件在載玻片界面產(chǎn)生僅50-100納米范圍的照明光，大大減少了離焦光，提高了檢測(cè)熒光分子的能力。由于其低光強(qiáng)和高空間分辨率，它是活細(xì)胞成像的關(guān)鍵技術(shù)。

在TIRF顯微術(shù)中，激發(fā)光不像在落射熒光顯微術(shù)中那樣來(lái)自聚焦物鏡，而是來(lái)自傾斜角度的光源，該光源可以穿過(guò)物鏡或不穿過(guò)物鏡。這提供了僅樣品表面~100納米的有效照明，大大提高了軸向分辨率(橫向分辨率仍受衍射限制)。對(duì)細(xì)胞的總光劑量被小化，減少了光毒性效應(yīng)，并消除了離焦熒光，給出了高得多的信噪比。

TIRF的光路可以有多種方式，但兩種主要方法是:通過(guò)物鏡耦合照明和檢測(cè)，以及使用棱鏡分離照明和檢測(cè)(圖3)。

基于目標(biāo)的TIRF

這里，像許多熒光顯微鏡一樣，激發(fā)光和發(fā)射光通過(guò)一個(gè)物鏡。對(duì)于TIRF，通過(guò)物鏡的光路必須校準(zhǔn)，以使離開(kāi)光學(xué)系統(tǒng)的光在超過(guò)臨界角時(shí)到達(dá)相同的位置。

這是通過(guò)使激光光源離軸進(jìn)入物鏡的后光瞳來(lái)實(shí)現(xiàn)的。離開(kāi)透鏡的入射角與離軸輸入光的范圍相關(guān)。高數(shù)值孔徑透鏡(%3E1.4 NA)對(duì)于從透鏡獲得足夠的傾斜角以超過(guò)臨界角并產(chǎn)生全內(nèi)反射(TIR)是必要的。基于目標(biāo)的TIRF的好處是發(fā)射發(fā)生在界面上，因此沒(méi)有組織或材料將發(fā)射的光扭曲回目標(biāo)，基于目標(biāo)的TIRF收集更多的光。然而，調(diào)整照明的角度比其他方法更困難，并且操縱倏逝場(chǎng)的自由度更小。