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與典同行|2020中國(guó)藥典增補(bǔ)版應(yīng)對(duì)方案——氨基酸篇
2023年10月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局發(fā)布了《中華人民共和國(guó)藥典》（2020年版）第一增補(bǔ)本，已于今年3月12日正式實(shí)施。其中收載新增品種47個(gè)，通用技術(shù)要求、指導(dǎo)原則6個(gè)；修訂或訂正品種646個(gè)、通用技術(shù)要求15個(gè)，以期更快更好地滿足藥品生產(chǎn)檢驗(yàn)、監(jiān)督管理等工作的需要。
截圖來(lái)源:國(guó)家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站
為更好地幫助客戶根據(jù)藥典新增通則和指導(dǎo)原則，開展相關(guān)檢測(cè)方法擴(kuò)項(xiàng)和升級(jí)，賽默飛針對(duì)藥典的新增內(nèi)容，特推出2020中國(guó)藥典增補(bǔ)版應(yīng)對(duì)方案專題。第一期我們聚焦增補(bǔ)本（四部）新增的“9120氨基酸分析指導(dǎo)原則"。
氨基酸作為構(gòu)成人體所需蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)，通常紫外吸收較弱，直接使用紫外方法檢測(cè)干擾較大，靈敏度低。故藥典中將通過(guò)合適的衍生試劑經(jīng)衍生化增加生色團(tuán)后，再使用液相色譜結(jié)合紫外檢測(cè)等手段作為藥品中氨基酸測(cè)定的常用方法。目前氨基酸衍生化主要分為柱前和柱后衍生，柱前衍生又有離線和在線衍生。藥典中常用的衍生化試劑主要有異硫氰酸苯酯（PITC）、氨基甲酸酯（AQC）、鄰苯二甲醛（OPA）、芴甲（FMOC）和2,4-二硝基氟苯（DNFB）等，不同的衍生化試劑在反應(yīng)原理、效率及穩(wěn)定性等方面不盡相同。
最新公布的2020版中國(guó)藥典第一增補(bǔ)本（四部），新增的9120氨基酸分析指導(dǎo)原則，除了對(duì)分析方法進(jìn)行了一定優(yōu)化外，方法三——柱前OPA和FMOC衍生氨基酸測(cè)定法中提到了自動(dòng)化柱前衍生法。
自動(dòng)化在線衍生-紫外檢測(cè)法
賽默飛Vanquish液相色譜的自動(dòng)進(jìn)樣器配合變色龍軟件（Chromeleon），可提供用戶自定義進(jìn)樣程序（User-Defined Program, UDP），從而替代人工，實(shí)現(xiàn)定制化、自動(dòng)化的在線氨基酸衍生操作，契合2020藥典增補(bǔ)9120氨基酸指導(dǎo)原則中“衍生化操作也可由具有自動(dòng)衍生功能的進(jìn)樣器完成"的需求。
Vanquish 液相色譜和自動(dòng)進(jìn)樣器
在線針內(nèi)衍生程序示例
（Position R:A2：硼酸鹽緩沖液；Position R:A3：OPA溶液；Position R:A4：FMOC溶液；Position R:A5：進(jìn)樣稀釋液）（點(diǎn)擊查看大圖）
方法結(jié)合OPA和FMOC衍生試劑，Acclaim 120 C18色譜柱（PN: 059148）和Vanquish自動(dòng)進(jìn)樣器在線針內(nèi)衍生功能，可以輕松實(shí)現(xiàn)氨基酸的在線自動(dòng)化衍生、分析。無(wú)需手動(dòng)衍生，節(jié)省了試劑消耗和人力成本，同時(shí)在線衍生程序編輯智能、簡(jiǎn)便，大幅提升了氨基酸檢測(cè)效率。
自動(dòng)在線衍生-紫外檢測(cè)法分析氨基酸
（點(diǎn)擊查看大圖）
另外，指導(dǎo)原則方法三中提到一級(jí)和二級(jí)氨基酸衍生物“經(jīng)反相高效液相色譜分離后需用紫外光檢測(cè)器在338nm和262nm波長(zhǎng)處分別檢測(cè)"?；陔p波長(zhǎng)檢測(cè)要求，客戶通常會(huì)選擇二極管陣列檢測(cè)器，或單通道紫外檢測(cè)器結(jié)合波長(zhǎng)切換等方法，而賽默飛Vanquish Core 紫外檢測(cè)器標(biāo)配雙檢測(cè)通道特點(diǎn)，無(wú)需波長(zhǎng)切換即可實(shí)現(xiàn)兩個(gè)波長(zhǎng)的同時(shí)檢測(cè)，結(jié)果優(yōu)于相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)高效液相色譜方法的檢測(cè)靈敏度。
非衍生-電霧式檢測(cè)法
賽默飛電霧式檢測(cè)器（Charged Aerosol Detector，CAD）作為通用型檢測(cè)領(lǐng)域的典型代表，憑借其在靈敏度、重現(xiàn)性以及響應(yīng)一致性等方面的顯著優(yōu)勢(shì)而備受用戶關(guān)注和青睞，成為國(guó)內(nèi)外各大藥企和科研院所在研發(fā)和質(zhì)量控制等應(yīng)用方面的一大利器。而基于大部分氨基酸紫外吸收較弱的特點(diǎn)，CAD又為氨基酸檢測(cè)，開辟了一條衍生方法以外的檢測(cè)捷徑。
Vanquish 電霧式檢測(cè)器（CAD）
CAD檢測(cè)器結(jié)合賽默飛Hypercarb多孔石墨化碳色譜柱（PN:35005-154630）在極性化合物分析方面的優(yōu)勢(shì)，可以實(shí)現(xiàn)無(wú)需衍生的氨基酸直接分析，大大簡(jiǎn)化了前處理步驟，也很好的規(guī)避了指導(dǎo)原則中提及的關(guān)于“二級(jí)氨基酸衍生重復(fù)性較差，OPA-氨基酸衍生物不穩(wěn)定"等實(shí)際問(wèn)題。兩種方法在重現(xiàn)性和靈敏度方面的表現(xiàn)基本相當(dāng)。
非衍生-電霧式檢測(cè)法直接分析氨基酸
（點(diǎn)擊查看大圖）
總 結(jié)
賽默飛Vanquish液相色譜平臺(tái)，所具備的多種類型的檢測(cè)器和靈活可定制的程序軟件，結(jié)合兼具合規(guī)和創(chuàng)新的分析色譜柱，既可以滿足自動(dòng)化在線氨基酸衍生分析要求，又能拓展無(wú)需衍生的CAD直接分析氨基酸方法。在滿足藥典第一增補(bǔ)本（四部）中的新增指導(dǎo)原則的同時(shí)，為相關(guān)制藥及食品等行業(yè)客戶在氨基酸檢測(cè)方面提供了更多更新穎的檢測(cè)思路和分析手段。