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定量PCR儀的分析方法及技術概述

閱讀:919        發(fā)布時間:2022-5-12
實時熒光定量PCR儀技術是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,*后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。  
1.Ct值的定義  
在熒光定量PCR技術中,有一個很重要的概念--Ct值。C代表Cycle,t代表threshold(閾值,臨界值),Ct值的含義是:每個反應管內(nèi)的熒光信號到達設定閾值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。  
2.熒光閾值的設定  
PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號,熒光閾值的缺省設置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍,即:threshold=10′SDcycle3-15  
3.Ct值與起始模板的關系  
研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線,其中橫坐標代表起始拷貝數(shù)的對數(shù),縱坐標代Ct值。因此,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。  
 

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