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超聲波細(xì)胞破碎儀使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題

閱讀:1147      發(fā)布時(shí)間:2022-7-1
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超聲波細(xì)胞破碎儀使用過(guò)程中遇到的問(wèn)題

  1.100g大腸桿菌溶于1L破碎液里(破碎掖:50mMTris-Cl(PH8.5)5mMEDTA0.14MNaCl),攪拌,發(fā)現(xiàn)菌液發(fā)粘,菌體不能夠很好分散,用高壓勻質(zhì)機(jī)破碎,加壓后,菌液不能進(jìn)入勻質(zhì)機(jī),速度很慢,請(qǐng)問(wèn)是何原因?  
  能有好的辦法解決,很好用勻質(zhì)機(jī)快速破碎菌體?解析:將破碎液的量加大,不能很好分散可能是量太大;超聲處理5-10分鐘,菌液粘度即可大大降低,也可促進(jìn)菌體分散。  
  2.怎樣合理選擇超聲波破碎儀參數(shù)(條件)?  
  解析:不同型號(hào)的設(shè)備功率不一樣,功率的大小決定了使用變幅桿的大小范圍(直徑2mm至幾十毫米),你使用多大的變幅桿就在設(shè)備的上調(diào)至該刻度(很簡(jiǎn)單的)!變幅桿的大小決定了處理量。一般情況,5ml以下選3mm,5~50ml可選6~8mm,50ml以上選10mm以上的變幅桿!占空比不用關(guān)心,主要是指超聲時(shí)間和停頓時(shí)間的比值。  
  3.為什么用塑料大試管,玻璃的不可以嗎?
  解析:不可以的,如果使用玻璃管,可能會(huì)碎裂,而通常使用的是塑料試管。超聲波是物質(zhì)介質(zhì)中的一種彈性機(jī)械波,它既是一種波動(dòng)形式,又是一種能量形式。超聲波破碎儀對(duì)細(xì)胞的作用主要有熱效應(yīng),空化效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)。熱效應(yīng)是當(dāng)超聲在介質(zhì)中傳播時(shí),摩擦力阻礙了由超聲引起的分子震動(dòng),使部分能量轉(zhuǎn)化為局部高熱(42-43℃)。空化效應(yīng)是在超聲照射下,生物體內(nèi)形成空泡,隨著空泡震動(dòng)和其猛烈的聚爆而產(chǎn)生出機(jī)械剪切壓力和動(dòng)蕩。另外,空化泡破裂時(shí)產(chǎn)生瞬時(shí)高溫(約5000℃)、高壓(可達(dá)500×104Pa),可使水蒸氣熱解離產(chǎn)生.OH自由基和.H原子,由.OH自由基和.H原子引起的氧化還原反應(yīng)可導(dǎo)致多聚物降解、酶失活、脂質(zhì)過(guò)氧化和細(xì)胞殺傷。機(jī)械效應(yīng)是超聲的原發(fā)效應(yīng),超聲波在傳播過(guò)程中介質(zhì)質(zhì)點(diǎn)交替地壓縮與伸張構(gòu)成了壓力變化,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)損傷。損傷作用的強(qiáng)弱與超聲的頻率和強(qiáng)度密切相關(guān)。  
  4.從細(xì)胞中提取酶,超聲波破碎儀破碎時(shí)間長(zhǎng)會(huì)影響到酶的活性,怎么辦?  
  解析:如果需要的是胞內(nèi)酶,細(xì)胞破碎程度和需要的酶獲得之間基本上有正比關(guān)系。破碎時(shí)間長(zhǎng)的確會(huì)影響到酶的活性。這就需要在最佳的破碎時(shí)間和酶活性之間做出判斷,最直接的辦法是先繪制相關(guān)曲線(酶活性和時(shí)間的關(guān)系曲線)。如果實(shí)驗(yàn)中超聲波破碎儀破碎的是棒狀桿菌(也是很難破壁的G+菌),破碎時(shí)間控制在30min左右,酶活較好。如果是基質(zhì)菌絲的話,好可以考慮用溶菌酶處理一下。


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