凱杰Ni-NTA Agarose試劑是親合層析用基質(zhì),用于純化帶有His標簽的重組蛋白。細胞裂解上清液上樣到純化基質(zhì)上,His-tagged蛋白結(jié)合,其他蛋白則流過基質(zhì)。洗滌后,His-tagged蛋白可在天然或變性條件下洗脫。
凱杰Ni-NTA Agarose試劑的特點:
一、一步純化就可從細胞裂解液中得到純度大于95%的蛋白
二、高親和力和高結(jié)合能力
三、可以選擇在天然或變性條件下純化蛋白
四、預(yù)先加載的即用型基質(zhì)適合任何規(guī)模的蛋白純化
五、提供自動純化和檢測的方法
QIAexpress Ni-NTA Protein Purification System基于獲得Ni-NTA(氨基三乙酸鎳)樹脂。該技術(shù)可在天然或變性條件下,從所有表達體系中一步純化幾乎所有的His-tagged蛋白。NTA含有四個鎳離子螯合位點,與鎳的結(jié)合能力比其他僅有三個金屬螯合位點的金屬螯合純化方法的結(jié)合能力強。多出的一個螯合位點可防止鎳離子脫落,因此具有更強的結(jié)合能力,蛋白純度比金屬螯合純化方法的蛋白純度高。QIAexpress技術(shù)可用于從桿狀病毒、哺乳動物細胞、酵母和細菌等各種表達體系中純化His-tagged蛋白。
His-tagged蛋白的純化包括四個步驟:裂解、結(jié)合、洗滌和洗脫。使用QIAexpress 技術(shù)純化重組蛋白無需依賴于蛋白的三維結(jié)構(gòu)或6xHis標簽。因此可實現(xiàn)在天然或變性條件下,從稀釋溶液或細胞裂解液中一步純化蛋白??墒褂脧娮冃詣┖拖礈靹└咝芙夂图兓荏w、膜蛋白和形成包涵體的蛋白。洗滌緩沖液中可包含有能高效去除非特異性結(jié)合產(chǎn)物的試劑。在溫和條件下加入100–250 mM咪唑作為競爭性洗脫試劑或降低pH值,可洗脫得到純化蛋白。