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轉(zhuǎn)染方法很多，常見的有：DEAE－葡聚糖法、磷酸鈣法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法、陽(yáng)離子聚合物 、逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA）、病毒介導(dǎo)法、Biolistic 顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法）、顯微注射法、電穿孔法等。常用的轉(zhuǎn)染方法有哪些不同？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、DEAE－葡聚糖法

原理：帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。

主要應(yīng)用：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

特點(diǎn)：相對(duì)簡(jiǎn)便、重復(fù)比磷酸鈣好,但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1,CV-1,COS細(xì)胞系。

二、磷酸鈣法

原理：磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

特點(diǎn)：不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高）,操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用 細(xì)胞建議用CSCL梯度離心，轉(zhuǎn)染時(shí)拷貝數(shù)較多。

三、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法

原理：帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物，然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合；另一種解釋是通過(guò)細(xì)胞是內(nèi)吞作用而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過(guò)高，中和脂質(zhì)體表面電核，而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

特點(diǎn)：使用方法簡(jiǎn)單，可攜帶大片段DNA，通用于各種類型的裸露DNA或RNA，能轉(zhuǎn)染各種類型的細(xì)胞，沒有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率，但在體內(nèi)，能被血清清除，并在肺組織內(nèi)累積，誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng)，導(dǎo)致高水平的毒性，這在很大程度上限制了其應(yīng)用。

四、陽(yáng)離子聚合物

原理：帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

特點(diǎn)：除了具有陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡(jiǎn)單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。

五、逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA）

原理：通過(guò)病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞，之后反轉(zhuǎn)入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

特點(diǎn)：可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大（<8kb）,細(xì)胞需處分裂期,需考慮安全因素

六、病毒介導(dǎo)法

原理：腺病毒(雙鏈DNA) 先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合，繼而在αv整合素介導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞。

主要應(yīng)用：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，特定宿主細(xì)胞

特點(diǎn)：可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮安全因素 

七、Biolistic 顆粒傳遞法 （基因槍粒子轟擊法）

原理：將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放，表達(dá)。主要應(yīng)用：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

特點(diǎn)：可用于：人的表皮細(xì)胞，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞

八、顯微注射法

原理：用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核 。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

特點(diǎn)：轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞 。

九、電穿孔法

原理：高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入。

主要應(yīng)用：穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

特點(diǎn)：適用性廣，除了質(zhì)粒外，還可轉(zhuǎn)染大的基因組（>65kb）但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，  需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件，拷貝數(shù)較少1-20。

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