一、動物原代細胞
動物原代細胞是通過機械或酶的方法，或兩者的結(jié)合，直接從動物組織中分離和純化出來的。它們通常攜帶來自特定組織(如腦、肝、胰腺、肺、心肌、腎、乳腺、前列腺、睪丸、甲狀腺、胃、小腸、結(jié)腸、骨骼肌、脂肪組織和皮膚)的原始動物細胞的所有特征。動物原代細胞可以從健康或患病的動物身上提取，在組織移除之前不需要進行其他實驗。
一旦目標組織在無菌條件下被消化和解剖，將被過濾和離心進一步純化，重懸的原代細胞將被計數(shù)并用冷凍保存培養(yǎng)基冷凍保存或用其有利的天然(由天然存在的生物液體組成，如血漿，組織提取物等)或人工培養(yǎng)基(由必需氨基酸，維生素，鹽，血清，碳水化合物，輔助因子等)在孵育前為其正常生長所需，培養(yǎng)基將在幾小時后根據(jù)特定細胞類型進行更換。例如，圖1顯示了從小鼠肝臟中分離和純化原代肝細胞的過程。在這種條件下純化的動物原代細胞被命名為傳代0 (P0)，它們既可以在冷凍瓶中作為庫存短時間冷凍保存，也可以直接在培養(yǎng)瓶中交付給我們的客戶。
到目前為止，AcceGen提供了900多種不同的動物原代細胞用于研究，提供了各種各樣的原代細胞，包括小鼠原代細胞、大鼠原代細胞、牛原代細胞、猴原代細胞、兔原代細胞、豬原代細胞和其他原代細胞，包括來自綿羊、鳥類、雞、豚鼠、火雞、馬、山羊和貓的原代細胞。此外，我們的動物原代細胞也涵蓋了許多不同的菌株。例如，AcceGen提供的小鼠原代細胞包括但不限于CD1、ICR、BALB/c、B129、CF1、C57BL/6、B6129SF2/J、C57BLKS/J和DBA/2菌株。
二、貼壁vs.懸浮
動物原代細胞既可以作為貼壁培養(yǎng)物生長，也可以保持懸浮狀態(tài)。貼壁細胞依賴于錨定，并以單層形式增殖，需要附著在固體或半固體底物上才能增殖。貼壁動物原代細胞在細胞外基質(zhì)的幫助下粘附在培養(yǎng)容器上，這些細胞通常來自于不動的組織，存在于結(jié)締組織網(wǎng)絡(luò)中，例如上皮細胞和成纖維細胞。由于這種培養(yǎng)血管的底部覆蓋著一層單細胞厚度的連續(xù)細胞，因此它們也被稱為單層培養(yǎng)。大多數(shù)動物原代細胞以貼壁培養(yǎng)的方式生長。由于它們是單層生長的，因此在培養(yǎng)維護時可以方便地將其直接轉(zhuǎn)移到蓋玻片上，并在后期的實驗中在顯微鏡下進行檢查。
懸浮細胞，也稱為非貼壁或錨定獨立細胞，不附著在培養(yǎng)容器表面。相反，它們在培養(yǎng)液中漂浮生長。懸浮細胞可以維持在沒有經(jīng)過組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中。然而，為了保持足夠的氣體交換，培養(yǎng)基可能需要攪拌，這通常是用磁力攪拌器或旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)燒瓶來實現(xiàn)的。此外，與貼壁動物原代細胞相比，懸浮動物原代細胞更容易傳代，生長速度更快，它們也不需要與胰蛋白酶或膠原酶解離，盡管每日細胞計數(shù)和活力測定可能需要遵循它們的生長模式。造血干細胞(來源于血液、骨髓或脾臟)和神經(jīng)干細胞是懸浮原代細胞的兩個例子。
三、動物原代細胞的優(yōu)勢
雖然動物原代細胞的壽命有限，但它們?yōu)檠芯咳藛T提供了一些du特的好處。首先，由于動物原代細胞無需實驗室修飾即可密切反映體內(nèi)條件，因此它們是在體內(nèi)研究細胞生物學(xué)功能的替代方法。作為人類系統(tǒng)的模型，動物原代細胞可用于檢查廣泛的疾病機制，并在將結(jié)果應(yīng)用于人類之前評估新的治療方法。動物原代細胞培養(yǎng)的理化和生理條件都是可調(diào)節(jié)的，如培養(yǎng)基的pH、溫度、O2/CO2濃度、滲透壓等。這樣的研究為了解廣泛的人類疾病提供了關(guān)鍵的見解。另一方面，對來自不同動物的分離細胞進行體外培養(yǎng)也有助于加深對不同細胞的不同功能和運作機制的理解。不同物種間細胞代謝的研究和細胞生理生化的研究就是很好的例子。此外，動物原代細胞也可以作為細胞毒性測定的重要模型。例如，可以研究各種藥物或化合物對特定細胞類型(如神經(jīng)元細胞或肝細胞)的作用。來自神經(jīng)、肝臟、胰腺、肺、心臟、腎臟、胃、腸、骨骼、脂肪、皮膚和眼部系統(tǒng)的動物原代細胞都是生物醫(yī)學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中常用的模型。此外，通過使用動物原代細胞，可以避免在實驗中使用動物的倫理、道德和法律問題。
為了進一步闡述動物原代細胞的du特優(yōu)勢，表1特地總結(jié)了原代細胞培養(yǎng)和連續(xù)細胞系之間的不同特征。
與原代細胞培養(yǎng)相比，連續(xù)細胞系具有無限數(shù)量的細胞代。它們在培養(yǎng)物中生長得更快，細胞密度更高。此外，由于連續(xù)細胞培養(yǎng)具有不朽性和致瘤性，它們沒有接觸抑制，失去了增殖的限制。它們通常以多層或懸浮的方式生長，具有在大規(guī)模生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的潛力。然而，與動物原代細胞相比，連續(xù)細胞系的主要缺點是染色體不穩(wěn)定、表型變異以及與供體組織相關(guān)的特異性和特征性標記物的變化[4]。因此，連續(xù)細胞系不能代表動物原代細胞的體內(nèi)狀態(tài)。
四、結(jié)論
直接從動物組織中分離的動物原代細胞保持了許多重要的標志物和體內(nèi)功能。然而，它們中的大多數(shù)具有有限的壽命和有限的擴增能力。因此，始終使用低傳代的動物原代細胞至關(guān)重要。盡管一些動物原代細胞類型，比如神經(jīng)元，甚至不具備分裂能力。
值得一提的是，動物原代細胞從來都不是100%純的，所以使用的細胞傳代越高，被污染的細胞生長超過目標細胞的風險就越大。同時，即使對于一些可以比其他細胞傳代次數(shù)更多的原代細胞類型，每次傳代總是會發(fā)生表型和遺傳變化。這些遺傳變化隨后會導(dǎo)致表觀遺傳變化。因此，我們強烈建議客戶盡可能早地使用動物原代細胞傳代，以防止遺傳漂變。
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