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重組蛋白產(chǎn)品正確溶解步驟

閱讀:593      發(fā)布時(shí)間:2024-9-24
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一、重組蛋白

重組蛋白(recombinant protein)是指應(yīng)用重組 DNA 或重組 RNA 技術(shù)而獲得的蛋白質(zhì)。重組蛋白工程先應(yīng)用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因(gene of interest,GOI),連接到適合的表達(dá)載體,導(dǎo)入到特定的宿主細(xì)胞,利用宿主細(xì)胞的遺傳系統(tǒng),表達(dá)出有功能的蛋白質(zhì)分子。重組蛋白的正確溶解步驟包括離心、溶解和(可能的話)進(jìn)一步處理。

重組蛋白產(chǎn)品正確溶解步驟


二、重組蛋白溶解步驟一

開蓋前離心試劑管。凍干粉在運(yùn)輸過程中可能會(huì)因顛簸而漂散并粘貼于管壁或管蓋上,所以在打開塑料瓶蓋前,需將凍干粉通過離心收集到管底,以便用很小體積的液體即可將凍干粉wan溶解。一般需要3000-3500rpm離心5min,效果良好。如果沒有高速離心機(jī),可以使用較低的轉(zhuǎn)速進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的離心。

?三、重組蛋白溶解步驟二

用無(wú)菌水重懸至0.1-1.0 mg/ml,不可振蕩。這個(gè)步驟即為溶解步驟,非常重要。使用推薦的溶液將凍干粉重懸至適當(dāng)?shù)臐舛取?duì)于短期實(shí)驗(yàn)(<=7天),建議的濃度不低于100 μg/mL。對(duì)于長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)(>=7天),需要使用含載體蛋白(如BSA、HSAFBS或海藻糖)的溶液進(jìn)一步稀釋,然后分裝凍存于-20°C-80°C。一定要用推薦的溶液重懸(或溶解)凍干粉。蛋白的溶解性與很多因素有關(guān),其中比較重要的是pH值和離子強(qiáng)度。產(chǎn)品說明上所標(biāo)明的溶解液是能夠?qū)⒃摷?xì)胞因子或重組蛋白wan溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強(qiáng)度與說明書中所標(biāo)明的不符,很多時(shí)候會(huì)造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能wan溶解或者根本無(wú)法溶解,這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。

四、重組蛋白溶解步驟三

該重懸液在2-8℃最長(zhǎng)可保存1周。用說明書上推薦的溶液將細(xì)胞因子或重組蛋白重懸到推薦的濃度后,細(xì)胞因子或重組蛋白可放置在2-8℃,即冰箱的冷藏室。在這種條件下,細(xì)胞因子或重組蛋白的活性最長(zhǎng)可保持1周。這對(duì)一個(gè)周期為5-7天的實(shí)驗(yàn),如DC(樹突狀細(xì)胞)的誘導(dǎo)成熟是足夠的。在此期間,只要每次從冰箱里吸取一定量的細(xì)胞因子或重組蛋白溶液加入到培養(yǎng)體系內(nèi)即可。

其實(shí),說明書上推薦的濃度對(duì)于一般的實(shí)驗(yàn)來講是比較高的。所以用戶通常會(huì)將該溶液進(jìn)一步稀釋后再放在4℃保存,待1周內(nèi)用完。如進(jìn)行稀釋,必須遵照下面第4步的方法,即需用含載體蛋白的溶液進(jìn)行稀釋,否則稀釋后的細(xì)胞因子或重組蛋白很容易會(huì)粘附在管壁或瓶壁上,使得溶液中的細(xì)胞因子或重組蛋白的濃度下降,細(xì)胞因子或重組蛋白的總活性則大為減弱。

重組蛋白產(chǎn)品正確溶解步驟

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指標(biāo)

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

來源

E8L

11263-MX

Recombinant Monkeypox Virus Zaire-96-1-16 E8L

    Protein,CF

Human embryonic kidney cell

H3L

11277-MX

Recombinant Monkeypox Virus H3L His-tag Protein,CF

Human embryonic kidney cell

A35R

11278-MX

Recombinant Monkeypox Virus A35R Fc Chimera Protein,CF

Human embryonic kidney cell

A30L

11279-MX

Recombinant Monkeypox Virus A30L Fc Chimera Protein,CF

Human embryonic kidney cell

A30L

11282-MX

Recombinant Monkeypox Virus A30L His-tag Protein,CF

Human embryonic kidney cell

A35R

11285-MX

Recombinant Monkeypox Virus A35R His-tag Protein,CF

Human embryonic kidney cell



重組蛋白產(chǎn)品正確溶解步驟





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