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細胞如若在生長過程中遇到漂浮困境，你有沒有想過會是操作不當？！接下來，跟隨康康一起，探討這個非微生物原因導致的細胞培養(yǎng)問題，并找到讓它正常發(fā)展的解決方案。

復蘇后細胞漂浮原因一：細胞本身貼壁能力較弱

比如細胞轉染的明星細胞293T，它生長較快，但貼壁能力弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。

293細胞

∝解決辦法：提前使用明膠包被板子，增強吸附性。另外，還建議使用TC處理（tissue culture treated）的培養(yǎng)瓶/皿促進細胞貼壁附著。

復蘇后細胞漂浮原因二：培養(yǎng)基選擇錯誤

比如293T細胞培養(yǎng)，推薦使用的培養(yǎng)基為DMEM（高糖）+10%FBS，但是如果使用RPMI-1640+10%FBS做為培養(yǎng)基，培養(yǎng)液糖分不足，故不夠支持細胞生長所需。雖然用錯了培養(yǎng)基，但這不代表細胞一定不能生長。但如果培養(yǎng)細胞中長時間使用不正確的培養(yǎng)基，甚至缺少必要營養(yǎng)組分（例如優(yōu)質的血清），那細胞真的就漂了。

∝解決辦法：參照細胞使用說明書或者實驗室預實驗結果，使用合適的培養(yǎng)體系。對于間充質干細胞這類生存條件苛刻的細胞，培養(yǎng)基和血清的質量要求會更高。

復蘇后細胞漂浮原因三：復蘇過程中操作不當

復蘇過程水溫太低，解凍時間不足，冰晶損傷了細胞；水溫太高，燙傷了細胞。

∝解決辦法：復蘇細胞過程，一般是從液氮罐中取出凍存管，立即放入到37℃水槽中快速解凍，搖晃凍存管，確保在1分鐘內完成解凍。

復蘇后細胞漂浮原因四：離心對細胞造成損傷

去除凍存液中殘留的DMSO過程，在細胞復蘇過程中，解凍完畢之后，為了防止殘留DMSO對細胞的毒性影響，很多小伙伴會將細胞懸液轉入到15mL離心管內，離心去上清，再重懸細胞接種培養(yǎng)。但這種情況，會導致剛復蘇還極為脆弱的細胞，因為離心機的離心力更為脆弱甚至破損死亡。

∝解決辦法：

其實除了少數(shù)對DMSO敏感的細胞之外（例如DMSO誘導HL-60分化成類中性粒細胞），絕大多數(shù)細胞應在解凍之后，直接接種在培養(yǎng)皿內，隔天再更換新鮮培養(yǎng)基去除DMSO。

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