胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)在儲(chǔ)存或使用過(guò)程中出現(xiàn)少量沉淀通常是正?,F(xiàn)象,但需根據(jù)沉淀的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)需求判斷是否需要處理。以下是具體分析
一、沉淀的常見(jiàn)原因
1. 纖維蛋白原聚合:
胎牛血清中含有纖維蛋白原(Fibrinogen),在解凍或長(zhǎng)期靜置后可能形成絮狀或顆粒狀沉淀(肉眼可見(jiàn)白色絮狀物)。這是最常見(jiàn)的正?,F(xiàn)象。
2. 磷酸鈣結(jié)晶:
血清中的鈣、磷離子在低溫或反復(fù)凍融時(shí)可能形成細(xì)微結(jié)晶(顯微鏡下可見(jiàn))。
3. 脂蛋白聚集:
血清中的脂類成分在低溫下可能析出,形成渾濁或沉淀。
4. 蛋白質(zhì)變性:
高溫、劇烈震蕩或反復(fù)凍融可能導(dǎo)致部分蛋白質(zhì)變性沉淀(通常伴隨顏色變化或渾濁)。
二、如何判斷是否正常?
特征 | 正常沉淀 | 異常變質(zhì) |
顏色 | 血清仍為淡黃色、透明 | 渾濁、發(fā)紅或發(fā)黑 |
沉淀形態(tài) | 白色絮狀或細(xì)顆粒,可溶解于37°C水浴 | 塊狀、無(wú)法溶解,或伴有異味 |
細(xì)胞培養(yǎng)影響 | 通常不影響細(xì)胞生長(zhǎng) | 細(xì)胞死亡、貼壁差或污染 |
三、如何處理沉淀?
常規(guī)操作:
將血清置于 37°C水浴 中輕輕搖晃至沉淀wanquan溶解(纖維蛋白原或磷酸鈣沉淀通??赡妫?/span>
溶解后 4°C靜置1小時(shí),取上清液使用(避免吸取底部沉淀)。
過(guò)濾除菌:
若沉淀較多或?qū)嶒?yàn)敏感(如干細(xì)胞培養(yǎng)),可用 0.22μm濾膜 過(guò)濾后使用。
四、需要更換血清的情況
以下情況可能提示血清變質(zhì),建議停止使用:
1. 沉淀無(wú)法通過(guò)37°C溶解,且血清渾濁、變色。
2. 血清有明顯異味(如酸敗味)。
3. 使用后細(xì)胞出現(xiàn)異常死亡或污染。
五、如何減少沉淀產(chǎn)生?
1. 分裝凍存:避免反復(fù)凍融,按需分裝為小份(如50ml/管),-20°C保存。
2. 緩慢解凍:4°C過(guò)夜解凍,或室溫靜置至部分融化后混勻。
3. 輕柔操作:避免劇烈搖晃或高溫環(huán)境(如長(zhǎng)時(shí)間置于37°C水?。?/span>
總結(jié)
少量白色絮狀沉淀(纖維蛋白原相關(guān))是正?,F(xiàn)象,不影響大多數(shù)實(shí)驗(yàn);若沉淀不可逆、血清性狀改變或影響細(xì)胞活性,則需更換新批次血清。建議選擇正規(guī)品牌(如Gibco、HyClone)并嚴(yán)格按說(shuō)明書儲(chǔ)存!
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