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首頁 >> 技術(shù)文章 >> 原核細胞實現(xiàn)外源基因表達的途徑
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轉(zhuǎn)錄調(diào)控原核細胞中的轉(zhuǎn)錄調(diào)控主要通過啟動子、操縱子和阻遏蛋白等元件來實現(xiàn)。啟動子是 RNA 聚合酶結(jié)合的位點,決定了基因轉(zhuǎn)錄的起始。操縱子則是一組相關(guān)基因的調(diào)控單元,通過阻遏蛋白的作用來控制基因的表達。
翻譯調(diào)控原核細胞中的翻譯調(diào)控主要通過核糖體結(jié)合位點、起始密碼子和終止密碼子等元件來實現(xiàn)。核糖體結(jié)合位點是核糖體與 mRNA 結(jié)合的位點,決定了翻譯的起始。起始密碼子和終止密碼子則分別標志著翻譯的開始和結(jié)束。
質(zhì)粒表達系統(tǒng)質(zhì)粒是一種獨立于染色體之外的環(huán)狀 DNA 分子,可以在原核細胞中自主復(fù)制。將外源基因克隆到質(zhì)粒上,通過轉(zhuǎn)化等方法將質(zhì)粒導(dǎo)入原核細胞中,即可實現(xiàn)外源基因的表達。質(zhì)粒表達系統(tǒng)具有操作簡單、表達效率高等優(yōu)點,是原核細胞中常用的外源基因表達途徑之一。
噬菌體表達系統(tǒng)噬菌體是一種感染細菌的病毒,可以將外源基因插入到噬菌體基因組中,通過感染原核細胞來實現(xiàn)外源基因的表達。噬菌體表達系統(tǒng)具有表達效率高、可大規(guī)模制備等優(yōu)點,適用于一些需要大量表達外源蛋白的研究。
整合型表達系統(tǒng)將外源基因整合到原核細胞的染色體上,使其成為原核細胞基因組的一部分,從而實現(xiàn)外源基因的穩(wěn)定表達。整合型表達系統(tǒng)具有表達穩(wěn)定、不易丟失等優(yōu)點,適用于一些需要長期表達外源蛋白的研究。
啟動子強度啟動子的強度決定了基因轉(zhuǎn)錄的效率,從而影響外源基因的表達水平。選擇合適的啟動子是提高外源基因表達效率的關(guān)鍵之一。
密碼子偏好性原核細胞對不同密碼子的使用頻率存在差異,這種密碼子偏好性會影響外源基因的翻譯效率。優(yōu)化外源基因的密碼子序列,使其符合原核細胞的密碼子偏好性,可以提高外源基因的表達水平。
培養(yǎng)條件培養(yǎng)條件如溫度、pH 值、培養(yǎng)基成分等會影響原核細胞的生長和代謝,從而影響外源基因的表達。優(yōu)化培養(yǎng)條件可以提高外源基因的表達效率。
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