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流式熒光法( CBA)檢測(cè)細(xì)胞因子之優(yōu)勢(shì)分析

時(shí)間:2022/11/7閱讀:5181
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細(xì)胞因子是由免疫細(xì)胞(如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等)和某些非免疫細(xì)胞(內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等)經(jīng)刺激而合成、分泌的一類(lèi)具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子

細(xì)胞因子在體內(nèi)具有重要的病理指示作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,很多細(xì)胞因子的表達(dá)水平會(huì)發(fā)生顯著變化。通過(guò)對(duì)體液中細(xì)胞因子濃度的檢測(cè)可以對(duì)疾病診斷和治療做出相應(yīng)評(píng)價(jià),具有重要的研究及臨床應(yīng)用價(jià)值。由于血清、細(xì)胞培養(yǎng)上清、積液中的細(xì)胞因子含量低,不容易檢測(cè),加上樣本數(shù)量少,傳統(tǒng)的方法無(wú)法滿(mǎn)足多細(xì)胞因子檢測(cè)。如傳統(tǒng)ELISA方法,一次只能檢測(cè)一種細(xì)胞因子,如果需要檢測(cè)10種細(xì)胞因子,需要的樣本量10,且需要進(jìn)行多次重復(fù)操作,耗費(fèi)了大量的樣本量和人力成本。

流式編碼微球芯片技術(shù)(Cytometric Bead Array, CBA),是用流式細(xì)胞儀對(duì)多重蛋白進(jìn)行定量檢測(cè)的方法,能夠同時(shí)對(duì)樣本中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行定性、定量檢測(cè),可應(yīng)用于細(xì)胞因子檢測(cè)。目前CBA 檢測(cè)系統(tǒng)采用聚苯熒光編碼微球(有磁性/非磁性)連結(jié)特定的捕獲抗體,捕捉待測(cè)物,同時(shí)再加入待測(cè)物的熒光抗體,三者形成夾心復(fù)合物,通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。流式細(xì)胞術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)可以進(jìn)行多參數(shù)檢測(cè),快速并且信息量大,其優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在:

(1)能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)樣本進(jìn)行多種檢測(cè)

血清Th1/Th2/Th17 相關(guān)細(xì)胞因子是實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)用到的檢測(cè)指標(biāo),然而實(shí)驗(yàn)室常用的模式動(dòng)物小鼠的血清量少,很難運(yùn)用傳統(tǒng)的方法如ELISA法進(jìn)行多因子檢測(cè),而CBA 法正好能解決這一問(wèn)題。碧芯生物的Beadstar-mPlexTM系列的多細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒是基于CBA技術(shù)的細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒,只需要一份樣品,就能同時(shí)定量檢測(cè)小鼠血清中的10種細(xì)胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、MCP-1、IFN-γ、TNF-α、IL-12p70、IL-1β),可滿(mǎn)足大多數(shù)研究的需求。

(2)所需樣本量少、靈敏度高等

傳統(tǒng)ELISA方法每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)樣本用量50-200 μl,基于CBA檢測(cè)方法的碧芯生物的Beadstar-mPlexTM多細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒樣本用量?jī)H需要20 μl,大部分指標(biāo)的線性范圍在3-2500 pg/mL。對(duì)于稀有樣本,即使?jié)舛容^低,Beadstar-mPlexTM多細(xì)胞因子檢測(cè)試劑也可定量同時(shí)檢測(cè)到多個(gè)細(xì)胞因子的表達(dá)水平。

3)穩(wěn)定性好

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)用于細(xì)胞因子檢測(cè)是一種高通量、快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。能避免酶聯(lián)免疫放大技術(shù)使信號(hào)失真導(dǎo)致的假陽(yáng)性

(4)檢測(cè)流程短,操作簡(jiǎn)單。

相比較于ELISA試劑盒的繁瑣操作,CBA操作更為簡(jiǎn)單迅速。Beadstar-mPlexTM系列的產(chǎn)品采用的是磁性熒光編碼微球。通過(guò)磁分選作用,將未反應(yīng)物去除,可省去大量重復(fù)離心清洗步驟。

(5)檢測(cè)率高(碧芯生物的Beadstar-mPlexTM多細(xì)胞因子*優(yōu)勢(shì)):由于正常人的血清中細(xì)胞因子濃度較低,在實(shí)際檢測(cè)中,目前大部分基于CBA試劑盒對(duì)正常人血清中各細(xì)胞因子的檢出率不高,一些血清樣本的熒光值甚至低于對(duì)照品濃度為0時(shí)的熒光值。結(jié)果的準(zhǔn)確性不高,究其原因主要是熒光編碼微球?qū)晒鈾z測(cè)抗體的非特異吸附較強(qiáng),導(dǎo)致噪音較高(噪音為對(duì)照品為0時(shí)的檢測(cè)熒光值-微球本底檢測(cè)熒光值)。當(dāng)檢測(cè)低值血清樣本中,血清中存在復(fù)雜的蛋白質(zhì)體系,不可避免這些蛋白質(zhì)同樣會(huì)與微球產(chǎn)生非特異性吸附,從而與熒光檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)非特異性吸附位點(diǎn),使最終的熒光檢測(cè)值下降。因此減少熒光編碼微球?qū)晒鈾z測(cè)抗體的非特異性吸附可顯著提升低值血清樣本檢測(cè)的準(zhǔn)確性。碧芯生物科技(海南省)有限公司通過(guò)不斷摸索和優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,通過(guò)合成一種特殊的三種粒徑不同的微球,再用Avidin修飾微球表面,最終構(gòu)建了約60種低吸附的熒光編碼微球。與普通的熒光編碼微球相比,這些被特殊的的微球具有對(duì)蛋白質(zhì)低非特異性吸附的特點(diǎn)。因此,用這種包裹好的熒光編碼微球構(gòu)建的抗原檢測(cè)試劑的噪音值明顯降低,可顯著提升靈敏度及低值血清樣本的檢出率

指標(biāo)名稱(chēng)

碧芯生物Beadstar-mPlex 檢出率

某進(jìn)口品牌細(xì)胞因子檢出率

IL-2

20/20100%

15/2075%

IL-4

12/2060%

4/20 (20%)

IL-6

18/2090%

10/20 (50%)

IL-10

20/20100%

4/20 (20%)

IL-17A

11/2055%

9/20 (45%)

TNF-α

18/2090%

4/20 (20%)

IFN-γ

17/2085%

3/20 (15%)




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