【纖連蛋白(FN)簡(jiǎn)介】：是細(xì)胞外基質(zhì)的一種高分子量（約500-600 kDa）糖蛋白，與稱為整合素的跨膜受體蛋白結(jié)合。纖連蛋白還與其他細(xì)胞外基質(zhì)蛋白結(jié)合，如膠原蛋白、纖維蛋白和硫酸肝素蛋白多糖。纖連蛋白以蛋白二聚體的形式存在，由兩條幾乎相同的多肽鏈組成，通過一對(duì)C端二硫鍵連接。每個(gè)纖連蛋白亞單位的氨基酸分子量為~230-~275 kDa，包含三種類型的模塊：I型、II型和III型。

檢測(cè)前準(zhǔn)備工作：

1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶溶解后再配置洗滌液?？蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被纖連蛋白（FN）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖連蛋白（FN）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

人纖連蛋白(FN)科研ELISA試劑盒 定量檢測(cè)組成：（檢測(cè)范圍請(qǐng)參考說明書）

注意：使用前請(qǐng)檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致。 

實(shí)驗(yàn)需要但未提供的材料及耗材：

1、酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱） 

2、精密移液器、吸頭、加樣槽 

3、蒸餾水或去離子水 

4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī) 

5、37℃水浴鍋或恒溫箱 

6、EP 管 

7、無粉一次性乳膠手

【軒澤康生物ELISA檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)】：

1.     產(chǎn)品種類齊全、質(zhì)量可靠、靈敏度高、效果穩(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)便

2.     免費(fèi)提供產(chǎn)品的報(bào)價(jià)、實(shí)驗(yàn)原理、產(chǎn)品用途及中英文說明書

3.     發(fā)貨及時(shí)（大量現(xiàn)貨供應(yīng)，上?？伤拓浬祥T及取標(biāo)本）

4.     免費(fèi)提供ELISA代測(cè)服務(wù)（代測(cè)結(jié)果包含樣本原始讀數(shù)OD值、標(biāo)本曲線分析、樣本濃度/樣本活性等）軒澤康擁有自己的實(shí)驗(yàn)室和技術(shù)團(tuán)隊(duì)，為您解決實(shí)驗(yàn)過程中遇到的問題，

 人纖連蛋白(FN)科研ELISA試劑盒 定量檢測(cè)操作流程如下：

【平衡試劑盒至常溫】：取出實(shí)驗(yàn)過程中所需板條，剩余半條用自封袋密封放回4攝氏度。

【加樣】：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。在樣本孔先加樣本10μl再加稀釋液40μl，（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）
【加酶】：標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔總每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL空白孔除外。
【溫育】：用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃恒溫箱溫育60分鐘。
【配液】：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
【洗滌】：小心揭掉封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置60秒后甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復(fù)5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

【顯色】：每孔先加入底物溶液A 50μl，再加入底物溶液B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光孵育15分鐘。
【終止】：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
【測(cè)定】：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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