目錄:廈門逸漠生物科技有限公司>>LUC細(xì)胞>>EGFP>> Daudi-LUC-eGFP(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)
參考價(jià) | ¥ 3000 |
訂貨量 | ≥1套 |
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更新時(shí)間:2024-07-18 15:25:25瀏覽次數(shù):601評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×106cells/T25或1mL凍存管 |
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貨號(hào) | IML-006 |
Daudi-LUC-eGFP(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)
產(chǎn)品基本信息:
細(xì)胞名稱:Daudi-LUC-eGFP(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)
種屬來(lái)源:人
組織來(lái)源:外周血
細(xì)胞形態(tài):淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性:懸浮生長(zhǎng)
培養(yǎng)基: RPMI-1640+10?S+1%雙抗
生長(zhǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
傳代方法:1:2至1:4,每周 2-3次
凍存條件:無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
支原體檢測(cè):無(wú)
注:Daudi-LUC-eGFP細(xì)胞puro藥篩濃度為0.5ug/ml,培養(yǎng)過(guò)程中可不用再添加puro,如若擔(dān)心抗性隨著傳代時(shí)間降低,可定期用0.2ug/ml濃度puro維持
細(xì)胞培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心3-5min分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無(wú)菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,然后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量對(duì)應(yīng)加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
懸浮細(xì)胞收貨注意事項(xiàng):
1、收貨時(shí)需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))
2、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)
a.如密度50%以下,建議換液并豎瓶培養(yǎng)
b.如密度50%-80%,建議換液培養(yǎng),隔天觀察密度
c.如密度90%,建議傳代
3、換液及傳代處理前,培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)(使細(xì)胞沉到瓶底);收集上清,必須將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤(rùn)洗瓶底并收集!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm,5min。
培養(yǎng)注意事項(xiàng):
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正?,F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。
4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm離心3 min,棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞,再900 rpm-1000 rpm離心3 min,,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后傳代建議1:2傳代 。注意: 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)