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▍產(chǎn)品描述

膠原蛋白是結(jié)締組織和內(nèi)部器官中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞外基質(zhì)的主要結(jié)構(gòu)成分，但在真皮、肌腱和骨骼中普遍。它在結(jié)構(gòu)上和基因上被分為許多不同的類型。I型膠原是一種異質(zhì)二聚體，由兩條alpha1(I)鏈和一條alpha2(I)鏈組成，在中性pH和37℃下自發(fā)形成三螺旋支架。I型膠原是培養(yǎng)肝細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié)、肌肉細(xì)胞、雪旺細(xì)胞、胚胎肺細(xì)胞、上皮細(xì)胞和其他細(xì)胞的優(yōu)良底物。

本公司鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞；也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長。

1.在使用逸漠鼠膠原蛋白 I 型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中觀察到PC-12 細(xì)胞的貼壁和生長。

2.在 1mg/mL 濃度以上，pH 為7 左右時可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠，NIH-3T3 細(xì)胞可在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12 細(xì)胞在三維膠表面正常生長。

▍產(chǎn)品信息

▍使用說明 

膠原蛋白 I 可凝膠到蓋玻片或組織培養(yǎng)皿上或用作細(xì)胞附著的薄膜涂層。細(xì)胞可在凝膠頂部，凝膠內(nèi)或凝膠層之間培養(yǎng)。 

▍薄層包被（Thin coating）程序

通常包被濃度為 5-10 µg/cm2，推薦濃度可選 5 µg/cm2。建議根據(jù)具體的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化。 

1）膠原蛋白 I 用 0.02 M 乙酸稀釋配置 50 μg/ mL 工作液，膠原蛋白 I 不溶于中性 pH 溶液。 

2）以 5 µg/cm2涂布培養(yǎng)皿，例如：一個 35 mm 的培養(yǎng)皿的表面積約為 10 cm2，1~2 mL 的工作液足以覆蓋此皿。 

3）室溫孵育 1 小時。 

4）小心吸取剩余溶液，用 PBS 或無血清培養(yǎng)基洗滌以除去多余乙酸。 

5）組織培養(yǎng)皿包被后可立即使用，也可風(fēng)干，在 2-8℃無菌條件下可貯存長達(dá)一周。 

▍膠凝程序 

膠原蛋白 I 按以下步驟使其 pH 達(dá)到堿性時凝膠 

1）將無菌5 cm左右的紗布海綿貼在150 mm培養(yǎng)皿的蓋子上來制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150 mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊。 

2）將膠原蛋白 I 均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據(jù)需要改變，膠原蛋白 I（50-100 μL）足以涂覆22 mm的蓋玻片。 對于直徑100 mm的培養(yǎng)皿，每個加入約6 mL；對于60 mm 培養(yǎng)皿添加約2.3 mL，對于35 mm培養(yǎng)皿添加約1 mL。 

3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。 

4）在無菌蒸餾水中（35 mm 培養(yǎng)皿加5 mL，60 mm 培養(yǎng)皿加10 mL 等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30 min。吸取原蒸餾 水并加0.5-1.0 mL 無菌蒸餾水，放置在層流罩中過夜。 

5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在 2-8°C。

▍備用膠凝程序

1）在冰上放置以下物品：膠原蛋白 I、無菌 10×PBS、無菌蒸餾水、無菌 1M NaOH

2）確定膠原蛋白 I 待使用溶液所需的最終濃度的體積。

3）在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白 I。

4）在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。

4.1 加入 10×PBS（終體積/10）mL

4.2 計算要使用的膠原蛋白 I 的體積（不要添加到管中直到步驟 4.6 為止）

4.3 向 10×PBS 溶液中加入（要加入的膠原體積×0.023）mL 的無菌冰冷1M NaOH

4.4 向 4.3 溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水：

添加蒸餾水體積=V（終）-V（膠原蛋白）-V(10× PBS）-V（1M NaOH）

4.5 混合管中的物質(zhì)并放入冰中。

4.6 加入膠原蛋白 I 并計算體積，混勻，冰上備用。

5）膠原蛋白 I 溶液可立即使用或在冰上放置 2-3 小時。

6）使用時，無菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中 37°C 凝膠 30 min。