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選對轉(zhuǎn)印膜，Western離成功又進(jìn)一步

閱讀：473 發(fā)布時間：2016-3-4

為了獲得一個漂亮的western blot結(jié)果，大家也是蠻拼的。一抗、二抗、封閉、顯色，各種優(yōu)化。轉(zhuǎn)印膜，大家好像不太在意。一般都是實(shí)驗室里有什么，我就用什么。NC、PVDF，。殊不知，這小小的一塊膜也與zui終的結(jié)果息息相關(guān)。如何選擇zui合適的轉(zhuǎn)印膜，小編來給你支兩招。

NC膜vs. PVDF膜

硝酸纖維素（NC）膜和聚偏二氟乙烯（PVDF）膜是westernblot中zui常用的兩種膜。NC膜是zui早用于westernblot的膜，它的優(yōu)點(diǎn)在于容易被乙醇溶液潤濕，同時產(chǎn)生不錯的結(jié)果。PVDF膜在1985年被開發(fā)出來，在嚴(yán)苛條件下表現(xiàn)出更高的蛋白保留，比如有機(jī)溶劑存在時，或者在酸性或堿性條件下。

與NC膜相比，PVDF膜有著更高的機(jī)械強(qiáng)度和出色的化學(xué)穩(wěn)定性，因此適合多次剝離（stripping）和反復(fù)檢測（reprobing）。同時，PVDF膜也有著更高的結(jié)合能力。NC膜的典型結(jié)合能力是80μg/cm2，而PVDF膜達(dá)到150-160μg/cm2，這意味它的靈敏度更高。由于PVDF膜的疏水性，它成為疏水蛋白質(zhì)（如膜蛋白）的。也正因為如此，PVDF膜在使用前需要一個簡短的甲醇潤濕步驟。

PVDF膜也有講究

看到這里，也許你準(zhǔn)備打訂購PVDF膜了吧，別急，這里面的學(xué)問還不少。同樣是PVDF膜，它們的性質(zhì)也有不同。以Pall生命科學(xué)的FluoroTrans家族為例，盡管這些PVDF膜都具有高的蛋白結(jié)合能力，但它們有著不同的側(cè)重點(diǎn)。

FluoroTrans PVDF膜是為N端蛋白測序而優(yōu)化的，具有高的吸附能力，高的蛋白保留能力以及對于化學(xué)溶劑的抗性。它的孔徑約為0.2 µm。固定在FluoroTrans膜上的蛋白不容易被去除，即使是用強(qiáng)烈的離液鹽。此外，它的熒光背景極低，適合熒光免疫檢測。

若是開展westernblot，FluoroTrans W PVDF膜則是*。它有著*的靈敏度、出色的分辨率，在所有檢測系統(tǒng)中都表現(xiàn)出非常低的背景水平。此外，它用結(jié)合能力和保留能力上的一點(diǎn)點(diǎn)犧牲，換取了轉(zhuǎn)移過程中極低的蛋白穿透。這種膜的通用性也很好，對10 kD的小蛋白和>100 kD的大蛋白都適用。因此，你不需要在實(shí)驗室里準(zhǔn)備0.2 µm和0.45 µm兩種孔徑的膜，只要這一種0.2 µm的膜就夠了。

各種包裝

轉(zhuǎn)印膜通常以各種包裝形式提供，比如FluoroTrans W PVDF膜，Pall就提供了一大卷的膜和各種預(yù)切膜。相比之下，一大卷（26 cm x 3.3 m）當(dāng)然更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，用多少切多少，不過要麻煩一點(diǎn)。各種大小的預(yù)切膜（7 x 9 cm、10 x 15 cm或20 x 20 cm）則省時省力，只是不太省錢。

使用小貼士

BSA通常作為NC膜的封閉液，但是對于PVDF膜，它的封閉效果并不好。因此，Pall建議，在封閉PVDF膜時選用0.5%的酪蛋白（Casein）。具體操作如下：將酪蛋白加入緩沖液中，然后在加熱板上加熱至80℃或直到溶解；不要煮沸溶液。在使用前冷卻至25-40℃。