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無血清凍存液的細(xì)胞凍存步驟和復(fù)蘇步驟

時(shí)間:2023/7/24閱讀:1341
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   無血清細(xì)胞凍存液通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株(腫瘤細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞),凍存細(xì)胞可在-80℃長期保存(>5年)。配方成分明確,不含動(dòng)物來源性蛋白,不含血清,可減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細(xì)胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營養(yǎng)成分,提高細(xì)胞存活率和活力,亦適合于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。

無血清凍存液

  操作步驟:
  細(xì)胞凍存步驟:
  1. 常規(guī)方法收集對(duì)數(shù)期的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞于試管中。
  2. 根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的密度和凍存管的大小確定所需凍存細(xì)胞數(shù)。
  3. 將所需數(shù)目的細(xì)胞懸浮液置于離心管中,1000rmp,5分鐘離心收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀,*棄去離心管中的上清液。
  4. 加入適量的CELLSAVING?細(xì)胞凍存液于離心管中,使細(xì)胞濃度約為5×105-1×107/ml。輕柔地混勻細(xì)胞,制成細(xì)胞混合液。
  5. 將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)記的凍存管中,建議每管1ml或1.5ml。
  6. 直接將分裝好的細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中,可長期冷凍保存。
  7. 如果想液氮中長期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天時(shí)間,方可移至液氮罐中保存。
  凍存細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
  1. 從冰箱中取出凍存的細(xì)胞,立即放入37℃水浴槽中快速解凍。
  2. 待凍存管中細(xì)胞混合液*融化后,將其中的混合液移至離心管中,1000rmp,5分鐘離心收集凍存細(xì)胞沉淀,移去上清液(操作時(shí) 小心,切勿將細(xì)胞沉淀移去)。
  3. 加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,使用移液管緩緩加入到細(xì)胞沉淀,輕柔地混勻,將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中。
  4. 鏡檢細(xì)胞后,可根據(jù)各自研究的需要和方法經(jīng)行細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)。
  無血清細(xì)胞凍存液,含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑,易于穿透細(xì)胞,避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子,降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量,為多種保護(hù)劑組合,在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù),大大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。無血清細(xì)胞凍存液不含牛血清,無動(dòng)物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存,無需冷凍,即取即用。凍存細(xì)胞,無需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。
  以上內(nèi)容僅供參考,希望對(duì)您有所幫助!

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